论文部分内容阅读
前言
焦虑障碍是精神科常见疾病之一,焦虑一恐惧情绪是其主要特征。研究表明成年中枢神经系统海马区的神经再生在焦虑障碍的发生、发展及治疗中起着重要作用。条件性恐惧的获得、表达、消除过程均与海马有关。本研究主要观察条件性恐惧消除对大鼠海马神经元再生的影响,从而探讨焦虑障碍的发生机制及治疗焦虑障碍的新途径。
材料与方法
一、实验材料
1、实验动物
采用雄性SD成年大鼠32只,体重220-270g,由中国医科大学实验动物中心提供。
2、实验试剂
5-BrdU(sigma),大鼠抗5-BrdU单克隆抗体(abcam,ab6326),SABC试剂盒、DAB显色剂均购自武汉博士德公司。
3、实验仪器
ZH-DSX2大鼠穿梭箱(安徽淮北正华科技公司),光学显微镜(Nikon,Japan)、冰冻切片机(Leica,Germany)、低温恒温箱(Yamato,China)。
二、实验方法
1、条件性恐惧模型制作
在较安静的环境下,将受试大鼠置于条件恐惧箱内适应1min,1min适应结束后,给大鼠十秒钟(60dB)声音刺激,并且在声音刺激的最后两秒给予(1mA)足底电刺激,最后一起结束,重复上述过程五次,时间间隔随机。
2、行为实验
大鼠进行连续三天、每天一次的足底电击刺激以后(每天实验时间:上午9:00-11:00),将其随机分为四组:BrdU2h实验组(8只)、BrdU2h对照组(8只)和BrdU28d实验组(8只)、BrdU28d对照组(8只)。连续六天每天将BrdU2h实验组和BrdU28d实验组大鼠暴露在电击箱中三分钟但是不再给予电刺激,使其形成恐惧性消除学习,同时每天观察并记录大鼠的僵住行为。消除后28d将BrdU28d实验组和BrdU28d对照组再次暴露在电击箱中,只给予声音刺激,测量其僵住行为。
3、神经再生的检测
在最后一次消除结束两小时后,全部大鼠腹腔注射溴脱氧尿苷(BrdU)(50mg/kg)。每两小时注射一次,一共注射四次,最后一次注射后两小时BrdU2h实验组和BrdU2h对照组进行心脏灌流处死,BrdU28d实验组和BrdU28d对照组28天后心脏灌流处死。应用免疫组织化学方法,检测各组大鼠海马齿状回(DG)的神经细胞增殖和再生数量的表达变化。
实验结果
1、在消除过程中大鼠的僵住时间逐渐下降,消除过程中第一天与第四天、第五天、第六天之间僵住时间均存在显著差异(P＜0.01)。
2、免疫组织化学染色结果显示BrdU2h实验组增殖神经细胞的数量明显高于BrdU2h对照组(P＜0.05);BrdU28d实验组存活的神经元数量明显高于BrdU28d对照组(P＜0.01)。
结论
1、消除过程中大鼠的僵住时间逐渐下降,表明消除抑制了大鼠焦虑恐惧情绪。
2、条件性恐惧实验组大鼠与对照组相比,大鼠海马新生神经细胞增殖和再生都明显增多。