【摘 要】
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以杜仲无菌苗为材料,进行了愈伤组织的诱导、继代培养、悬浮培养研究,建立了摇瓶悬浮培养体系,测定了培养过程中次生代谢产物总黄酮和绿原酸的含量。培养基的种类、外植体来
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以杜仲无菌苗为材料,进行了愈伤组织的诱导、继代培养、悬浮培养研究,建立了摇瓶悬浮培养体系,测定了培养过程中次生代谢产物总黄酮和绿原酸的含量。培养基的种类、外植体来源以及植物激素的配比对杜仲愈伤组织的诱导率及愈伤组织生长状况均有很大影响。经过筛选确定杜仲无菌苗子叶为适合的诱导材料,在此基础上进一步优化了愈伤组织培养条件,得到了愈伤组织生长的适应培养基B5+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+3%蔗糖,初始pH5.8。同时进行了愈伤组织的培养,愈伤组织培养18d生物量达到最大,增长了3.67倍,黄酮与绿原酸最高含量分别为12.25mg/g和1.564mg/g。杜仲细胞悬浮培养过程中,在固体培养基的基础上重新优化了基本培养基及激素配比,并研究了接种量、碳源种类、蔗糖浓度、pH值对悬浮细胞生长的影响,得到了悬浮培养的适宜生长条件:B5+0.5mg/L NAA+0.6mg/L 6-BA+3%蔗糖,初始pH5.52,初始接种量为1.6g?DCW/L。同时,测定了在筛选出的培养条件下杜仲悬浮细胞活力变化、生长动力学、底物消耗动力学、黄酮与绿原酸的生产动力学。发现在该条件下生长的杜仲细胞最大生物量积累可达6.8g?DCW /L,最大比生长速率μmax=0.665d-1。杜仲悬浮细胞生长曲线近似于“S”型,对数生长期为2～8d。细胞生长动力学方程为:悬浮培养条件下次生代谢产物黄酮与绿原酸最高含量分别达到16.63mg/g和3.93mg/g,产量分别达到113.08mg/L和26.57mg/L,均高于固体培养的含量。
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