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目的：
通过研究Wnt信号通路上相关因子在脑梗死发生后不同时间点的表达变化规律，从促进神经发生的角度深入探讨电针治疗脑梗死的分子机制。
方法：
280只5~6周龄健康雄性Wistar大鼠，随机分为电针组、模型组、假手术组和空白组，前三组每组90只并按照术后1h、3h、6h、9h、12h、24h、3d、7d、12d各分为9个观测时相组，空白组10只。电针组通过改良的Longa法建立永久性MCAO大鼠模型，予疏密波，2/15Hz，2mA电针刺激人中穴（Du26），留针20min，1h、3h、6h、9h、12h、24h时相组大鼠电针治疗1次，其余时相组每日1次。模型组建模方法同电针组，假手术组不插入线栓，其余同模型组。模型组、假手术组和空白组只抓取固定，不进行任何治疗。用NSS于手术前、手术后及取材前分别对各组大鼠的神经功能缺损程度进行评分。取材后，免疫荧光双标记法观察缺血侧海马齿状回（Dentatedgyrus，DG）和室管膜下区(Subventricularzone，SVZ)内源性神经干细胞（endogenousNeuralStemCells，eNSCs）的增殖情况；RT-PCR及WesternBlot法检测大鼠右侧缺血区脑组织Wnt信号通路关键因子Wnt7a、GSK-3β和LEF1mRNA及蛋白表达变化及电针的干预效应；RT-PCR及WesternBlot法检测大鼠右侧缺血区脑组织Wnt信号通路抑制因子DKK1、WIF1和sFRP1的mRNA及蛋白表达变化以及电针的干预效应。
结果：
1.电针干预对大鼠NSS评分的影响：空白组及假手术组的NSS评分均为0；MCAO后，模型组及电针组大鼠NSS评分随缺血时间延长呈逐渐下降趋势；各时相电针组大鼠NSS评分均低于同时相模型组，在3d、7d、12d时差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。
2.脑梗死发生后，3d时模型组和电针组大鼠缺血侧DG区和SVZ区出现BrdU+/Nestin+阳性细胞表达，7d时明显增多。3d和7d电针组DG区和SVZ区BrdU+/Nestin+阳性细胞表达均明显高于同时相模型组。
3.电针干预对Wnt信号通路关键因子Wnt7a、GSK-3β、LEF1mRNA及蛋白表达的影响：
（1）对Wnt7amRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面，模型组和电针组3h～12d表达高于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h～3d表达高于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组和电针组6h～12d表达高于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组24h～3d表达高于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。
（2）对GSK-3βmRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面，模型组12h～24h表达低于空白组（P＜0.05，P＜0.01），9h~24h表达低于同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组9h~12d表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组9h、3d~12d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组24h表达低于空白组（P＜0.01），24h~3d表达低于同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h~12d表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h、7d~12d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。
（3）对LEF1mRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面：模型组和电针组3h~12d表达高于空白组和同时相假手术组（P＜0.01）；电针组24h~12d表达高于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组和电针组6h~12d表达高于空白组及同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组3d~12d表达高于同时相模型组（P＜0.05）。
4.电针干预对Wnt信号通路抑制因子DKK1、WIF1及sFRP1的mRNA及蛋白表达的影响：
（1）对DKK1mRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面：模型组24h表达低于空白组（P＜0.01），24h~3d表达低于同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组24h~7d表达低于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h~3d表达低于同时相模型组（P＜0.05）。在蛋白表达方面，模型组3d表达低于空白组和同时相假手术组（P＜0.01）；电针组3d~12d表达低于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组24h~12d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。
（2）对WIF1mRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面：模型组12h表达低于空白组（P＜0.01），12h~3d表达低于假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h~3d表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.01）；电针组12h~3d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组24h表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.05）；电针组24h~3d表达低于空白组（P＜0.01），24h~7d表达低于同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组24h~12d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。
（3）对sFRP1mRNA和蛋白表达的影响：在mRNA方面：模型组24h~3d表达低于空白组（P＜0.05），12h~3d表达低于假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h~3d表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.01）；电针组12h~7d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组24h表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.05）；电针组24h~7d表达低于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组各24h~7d表达低于同时相模型组（P＜0.05）。
结论：
1.电针干预可明显改善MCAO大鼠神经功能缺损症状。
2.电针干预可明显促进大鼠缺血侧DG区和SVZ区的eNSCs增殖。
3.电针干预可明显上调MCAO模型大鼠缺血区脑组织Wnt信号通路因子Wnt7a、LEF1mRNA及蛋白的表达，下调GSK-3βmRNA及蛋白的表达，促进Wnt信号通路的激活。
4.电针干预能明显下调MCAO模型大鼠缺血区脑组织Wnt信号通路抑制因子DKK1、WIF1和sFRP1mRNA及蛋白的表达，降低其对Wnt信号通路的抑制作用，促进Wnt信号通路的激活。
5.电针干预可能通过双向良性调控Wnt信号通路因子Wnt7a、GSK-3β、LEF1及抑制因子DKK1、WIF1、SFRP1的表达促进Wnt信号通路的激活，促进eNSCs增殖。
通过研究Wnt信号通路上相关因子在脑梗死发生后不同时间点的表达变化规律，从促进神经发生的角度深入探讨电针治疗脑梗死的分子机制。
方法：
280只5~6周龄健康雄性Wistar大鼠，随机分为电针组、模型组、假手术组和空白组，前三组每组90只并按照术后1h、3h、6h、9h、12h、24h、3d、7d、12d各分为9个观测时相组，空白组10只。电针组通过改良的Longa法建立永久性MCAO大鼠模型，予疏密波，2/15Hz，2mA电针刺激人中穴（Du26），留针20min，1h、3h、6h、9h、12h、24h时相组大鼠电针治疗1次，其余时相组每日1次。模型组建模方法同电针组，假手术组不插入线栓，其余同模型组。模型组、假手术组和空白组只抓取固定，不进行任何治疗。用NSS于手术前、手术后及取材前分别对各组大鼠的神经功能缺损程度进行评分。取材后，免疫荧光双标记法观察缺血侧海马齿状回（Dentatedgyrus，DG）和室管膜下区(Subventricularzone，SVZ)内源性神经干细胞（endogenousNeuralStemCells，eNSCs）的增殖情况；RT-PCR及WesternBlot法检测大鼠右侧缺血区脑组织Wnt信号通路关键因子Wnt7a、GSK-3β和LEF1mRNA及蛋白表达变化及电针的干预效应；RT-PCR及WesternBlot法检测大鼠右侧缺血区脑组织Wnt信号通路抑制因子DKK1、WIF1和sFRP1的mRNA及蛋白表达变化以及电针的干预效应。
结果：
1.电针干预对大鼠NSS评分的影响：空白组及假手术组的NSS评分均为0；MCAO后，模型组及电针组大鼠NSS评分随缺血时间延长呈逐渐下降趋势；各时相电针组大鼠NSS评分均低于同时相模型组，在3d、7d、12d时差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。
2.脑梗死发生后，3d时模型组和电针组大鼠缺血侧DG区和SVZ区出现BrdU+/Nestin+阳性细胞表达，7d时明显增多。3d和7d电针组DG区和SVZ区BrdU+/Nestin+阳性细胞表达均明显高于同时相模型组。
3.电针干预对Wnt信号通路关键因子Wnt7a、GSK-3β、LEF1mRNA及蛋白表达的影响：
（1）对Wnt7amRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面，模型组和电针组3h～12d表达高于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h～3d表达高于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组和电针组6h～12d表达高于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组24h～3d表达高于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。
（2）对GSK-3βmRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面，模型组12h～24h表达低于空白组（P＜0.05，P＜0.01），9h~24h表达低于同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组9h~12d表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组9h、3d~12d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组24h表达低于空白组（P＜0.01），24h~3d表达低于同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h~12d表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h、7d~12d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。
（3）对LEF1mRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面：模型组和电针组3h~12d表达高于空白组和同时相假手术组（P＜0.01）；电针组24h~12d表达高于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组和电针组6h~12d表达高于空白组及同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组3d~12d表达高于同时相模型组（P＜0.05）。
4.电针干预对Wnt信号通路抑制因子DKK1、WIF1及sFRP1的mRNA及蛋白表达的影响：
（1）对DKK1mRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面：模型组24h表达低于空白组（P＜0.01），24h~3d表达低于同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组24h~7d表达低于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h~3d表达低于同时相模型组（P＜0.05）。在蛋白表达方面，模型组3d表达低于空白组和同时相假手术组（P＜0.01）；电针组3d~12d表达低于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组24h~12d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。
（2）对WIF1mRNA和蛋白表达的影响：在mRNA表达方面：模型组12h表达低于空白组（P＜0.01），12h~3d表达低于假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h~3d表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.01）；电针组12h~3d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组24h表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.05）；电针组24h~3d表达低于空白组（P＜0.01），24h~7d表达低于同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组24h~12d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。
（3）对sFRP1mRNA和蛋白表达的影响：在mRNA方面：模型组24h~3d表达低于空白组（P＜0.05），12h~3d表达低于假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组12h~3d表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.01）；电针组12h~7d表达低于同时相模型组（P＜0.05，P＜0.01）。在蛋白表达方面，模型组24h表达低于空白组及同时相假手术组（P＜0.05）；电针组24h~7d表达低于空白组和同时相假手术组（P＜0.05，P＜0.01）；电针组各24h~7d表达低于同时相模型组（P＜0.05）。
结论：
1.电针干预可明显改善MCAO大鼠神经功能缺损症状。
2.电针干预可明显促进大鼠缺血侧DG区和SVZ区的eNSCs增殖。
3.电针干预可明显上调MCAO模型大鼠缺血区脑组织Wnt信号通路因子Wnt7a、LEF1mRNA及蛋白的表达，下调GSK-3βmRNA及蛋白的表达，促进Wnt信号通路的激活。
4.电针干预能明显下调MCAO模型大鼠缺血区脑组织Wnt信号通路抑制因子DKK1、WIF1和sFRP1mRNA及蛋白的表达，降低其对Wnt信号通路的抑制作用，促进Wnt信号通路的激活。
5.电针干预可能通过双向良性调控Wnt信号通路因子Wnt7a、GSK-3β、LEF1及抑制因子DKK1、WIF1、SFRP1的表达促进Wnt信号通路的激活，促进eNSCs增殖。