【摘 要】
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对虾白斑综合症病毒(WSSV)是对虾和其他甲壳类动物的重要病原体,目前已有4个毒株完成全基因组测序,其编码基因180个ORF,但对于大部分的基因的功能尚不清楚。为了深入开展WSSV
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对虾白斑综合症病毒(WSSV)是对虾和其他甲壳类动物的重要病原体,目前已有4个毒株完成全基因组测序,其编码基因180个ORF,但对于大部分的基因的功能尚不清楚。为了深入开展WSSV功能基因组研究,本文构建了病毒基因表达库,可在原核细菌和真核细胞中进行相关研究。本实验采用iel p(-94+52)和T7启动子成功构建了穿梭载体,该载体可启动基因在E.Coli和High Five细胞中表达。利用该载体成功克隆162个WSSV的基因,其中,在E.Coli中,共94个克隆可以表达。在High Five细胞中,共102个克隆可以表达。该基因表达库的构建为今后相关基因功能的研究奠定基础。WSV249已被证明是E3连接酶,但还没找出其作用的底物及其泛素化途径。前期实验初步认为WSV249表达定位在核周及中心体。本实验利用构建的穿梭质粒,在昆虫细胞中表达WSV249并观察其在昆虫细胞High Five的定位,发现其可能定位于中心体上。转移到哺乳动物细胞293T中与中心体共表达定位,确定WSV249在细胞中表达定位在中心体上。这一研究结果为今后寻找WSV249的泛素化底物指明方向。
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