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[目的]
构建重组质粒pcDNA3.1/DLC-1并转染至DLC-1基因阴性表达细胞以探讨DLC-1基因对细胞增殖、克隆形成、侵袭能力以及细胞凋亡水平的影响，同时研究DLC-1基因及其介导的Rho/ROCK信号转导通路在结直肠癌HT-29细胞生物学行为中的作用.
[方法]
1.应用RT-PCR技术检测结直肠癌细胞LoVo和HT-29中DLC-1mRNA水平表达.
2.构建重组质粒pcDNA3.1/DLC-1并测序鉴定。
3.脂质体介导将pCDNA3.1/DLC-1转染到DLC-1基因阴性表达的细胞中，应用RT-PCR和Western blot检测细胞转染前后DLC-1mRNA及其蛋白水平的表达.
4.Rho激酶（Rho-associated kinase）抑制剂Y27632处理细胞。
5.Western blot检测p-MLC蛋白水平的改变.
6.MTT、平板克隆、Transwell小室实验、流式细胞技术检测细胞生物学行为改变。
[结果]
1.RT-PCR检测结果显示HT-29细胞不表达DLC-1mRNA，LoVo细胞高表达DLC-1mRNA.
2.成功构建含有DLC-1基因的重组质粒（pcDNA3.1/DLC-1），转染后HT-29细胞可稳定表达DLC-1mRNA及蛋白
3.Western blot检测结果显示：DLC-1基因转染HT-29细胞后，对照组和空载组p-MLC蛋白表达水平无显著差异（P>0.05）；转染组与对照组相比p-MLC蛋白表达水平明显下调（P<0.05）；Rho激酶抑制剂Y27632作用于DLC-1基因转染前后的HT-29细胞，对照加Rho激酶抑制剂组、空载加Rho激酶抑制剂组与对照组相比p-MLC蛋白表达水平下调（P<0.05）；转染加Rho激酶抑制剂组与转染组相比p-MLC蛋白表达水平明显下调（P<0.05）.
4.对照组和空载组HT-29细胞增殖、克隆形成、侵袭能力以及细胞凋亡水平无显著差异（P>0.05）；DLC-1基因转染组与对照组相比细胞增殖、克隆形成、侵袭能力明显减弱（P<0.05），而细胞凋亡水平明显增高（P<0.05）；Rho激酶抑制剂Y27632作用于DLC-1基因转染前后的HT-29细胞结果显示：对照加Rho激酶抑制剂组、空载加Rho激酶抑制剂组与对照组相比细胞增殖、克隆形成、侵袭能力减弱（P<0.05），而细胞凋亡水平增高（P<0.05），转染加 Rho激酶抑制剂组与转染组相比细胞增殖、克隆形成、侵袭能力减弱（P<0.05），而细胞凋亡水平增高（P<0.05）。
[结论]
1.HT-29细胞不表达DLC-1mRNA，LoVo细胞高表达DLC-1mRNA；成功构建pcDNA3.1/DLC-1重组质粒，转染后HT-29细胞可稳定表达DLC-1mRNA及蛋白.
2.DLC-1基因可诱导p-MLC表达下调；Rho激酶抑制剂Y27632可不同程度地抑制p-MLC表达，提示DLC-1基因可能发挥抑制Rho激酶作用.
3.DLC-1基因对HT-29细胞的增殖、克隆形成、侵袭能力具有抑制作用，对HT-29细胞的凋亡水平具有促进作用.
4.DLC-1基因可能通过抑制Rho激酶活性影响Rho/ROCK信号转导通路的活化调控结直肠癌细胞HT-29生物学行为。