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大肠杆菌(Escherichia coli)是一种异养兼性厌氧性细菌,是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌。研究发现,一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物均具有致病性。据估计仅大肠杆菌K1在世界范围内引起的脑膜炎每年就导致50000人的死亡,对它的关注也日益增多。
由于L-型鼠李糖及其合成相关的酶均没有在人类中发现,因此L-型鼠李糖的合成途径被认为是可能的药物靶点。大肠杆菌K1部分菌株O抗原为O2型,O2型抗原含有L-型鼠李糖,因此本论文选用了菌株44277(O2:K1)来研究大肠杆菌中L-型鼠李糖的合成。
L-型鼠李糖的合成需要四种酶的参与,RmlB为合成所需的第二个酶。将大肠杆菌44277的rmlB基因进行克隆和表达,通过酶活测定,证明RmlB具有dTDP-D-glucose4,6-dehydratase活性。通过同源重组的方法获得了基因敲除突变株△rmlB。与野生株相比,突变株的表型没有发生变化;突变株脂多糖O糖链结构也未发生变化,L-型鼠李糖仍然存在。gmd基因编码的GmD结构及功能与RmlB相似,在△rmlB突变株中将gmd基因敲除,得到的双敲突变株仍然含有鼠李糖,这说明在突变株△rmlB中,L-鼠李糖的合成不依赖于或者不完全依赖于GmD。
研究结果表明,大肠杆菌44277 L-型鼠李糖的合成不依赖于或者不完全依赖于RmlB,可能有其它新途径或者新酶存在。