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背景： 藏花酸（Crocetin）为藏红花的主要有效成分之一，其结构为多不饱和共轭烯酸，属于类胡萝卜素，基原为藏红花柱的上部及柱头或茜草科植物栀子的果实。近年来对藏花酸（Cro）的研究有很多，大多以药理效应方面的研究为主，对Cro药代动力学方面的研究较少，尤其是对其代谢途径和代谢机制的探索非常局限。本课题预期通过Cro的体外代谢研究，阐明介导Cro代谢的具体CYP450酶，为预测药物的相互作用和药物代谢的多态性以及更加深入了解Cro的代谢机制，为指导临床合理用药提供实验依据和理论基础。 目的： 通过肝微粒体体外代谢的研究方法研究 Cro在大鼠和人肝微粒体中的代谢途径和代谢机制，探讨在大鼠和人肝微粒体中，Cro的酶促动力学特征以及CYP450酶抑制剂对Cro在代谢中的影响，明确有哪些CYP450酶介导了Cro在大鼠和人肝微粒体中的代谢。同时探索 Cro在人和大鼠肝微粒体代谢途径中的种属差异，为更进一步研究 Cro的代谢机制及临床的合理用药提供更好的理论和实验依据。 方法： 1、建立Cro样品处理方法和HPLC检测方法。 2、通过温孵时间、肝微粒体浓度、底物浓度三个方面来考察Cro在大鼠和人肝微粒体代谢中的酶促动力学特征。 3、研究CYP2C8抑制剂甲氧苄氨嘧啶、CYP3A4抑制剂酮康唑、CYP2D6抑制剂奎尼丁、CYP1A2抑制剂α-萘黄酮、CYP2C19抑制剂奥美拉唑对Cro在大鼠和人肝微粒体中代谢的影响。 结果： 1、建立了检测肝微粒体中Cro的高效灵敏HPLC方法。 2、Cro在37℃和120rpm的条件下进行孵育，在5-80min范围呈线性消除，由此确定孵育时间为80min；肝微粒体蛋白浓度在0.1-0.75 mg/mL范围内，随着蛋白浓度的增加，Cro的代谢也随之加快，当蛋白浓度达到0.75mg/mL之后代谢趋于稳定，因此肝微粒体蛋白浓度定为0.75mg/mL。底物浓度在1.25-20μg/mL浓度范围内，随底物浓度的增加，Cro的代谢呈近似线性消除，当Cro浓度达到40μg/mL时，其代谢基本接近饱和状态。明确了Cro在大鼠和人肝微粒体的代谢符合酶促动力学的特征。根据米氏方程（Eadie-Hofstee）来计算Cro在代谢中的酶促动力学参数。Cro在大鼠肝微粒体中的代谢为 Km=32.58±3.52μM，Vmax=40.02±2.32 pmoL/min/pmoL，Clint=1.23±0.14μL/min/pmoL；Cro在人肝微粒体中的代谢为 Km=38.71±4.01μM,Vmax=52.37±4.15pmoL/min/pmoL,Clint=1.35±0.26μL/min/pmoL。 3、KET明显抑制中、高浓度组Cro的代谢，α-NF抑制低、高浓度组Cro的代谢，同时QUI抑制高浓度、OME抑制中浓度及TMP抑制低浓度Cro的代谢。进一步研究在Cro在人肝微粒体中的代谢情况，表明α-NF可抑制低、中、高三个浓度Cro的代谢，而QUI对中、高浓度Cro的代谢有抑制作用，同时KET也可以明显抑制低、高浓度Cro的代谢。 结论： 1、建立了灵敏可靠的HPLC法检测Cro在肝微粒体中的代谢。 2、实验数据表明Cro在大鼠和人肝微粒体中的代谢过程符合酶促动力学特征。 3、在大鼠肝微粒体中，CYP3A介导了中、高浓度Cro的代谢，CYP1A介导了低、高浓度Cro的代谢，表明在大鼠肝微粒体中Cro的代谢可能是CYP3A和CYP1A亚酶介导的。另外，CYP2D和CYP2C也有参与Cro在大鼠肝微粒体中的代谢。进一步在人肝微粒体中进行实验，结果显示CYP1A2介导了低、中、高三个浓度Cro在人肝微粒体中的代谢，CYP2D6介导了中、高浓度并且CYP3A4介导了低、高浓度Cro的代谢，表明在人肝微粒体中Cro的代谢主要由CYP1A2，CYP3A4和CYP2D6介导。