【摘 要】
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蜕皮激素受体由EcR和USP二聚体组成，在昆虫生长、变态发育和生殖过程中起着十分关键的调控作用。在多数鳞翅目昆虫中，EcR和USP各有两个不同的转录产物，分别为EcRA、EcRB1、USP1
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蜕皮激素受体由EcR和USP二聚体组成，在昆虫生长、变态发育和生殖过程中起着十分关键的调控作用。在多数鳞翅目昆虫中，EcR和USP各有两个不同的转录产物，分别为EcRA、EcRB1、USP1和USP2。目前，有关这4种蜕皮激素受体转录产物的研究虽然比较多，但多分散在不同昆虫物种和局限于单个基因，缺乏系统性，这不利于揭示蜕皮激素受体各个组分的功能。此外，EcR/USP二聚体的具体组成及其表达调控机制尚不清楚。为解决这些问题，我们以一种重要鳞翅目害虫——斜纹夜蛾(Spodoptera litura)为研究对象，克隆了这4种蜕皮激素受体基因（EcRA、EcRB1、USP1和USP2），其开放阅读框分别为1551，1776，1404和1245bp，编码516，589，468和415个氨基酸，分子量大小分别为58，66，52和47 kDa。EcRA和EcRB1及USP1和USP2均主要是在N段即转录激活区有所不同，在EcRB1中还发现了两个普遍性的氨基酸缺失:LECLQ和QTW。我们采用定量PCR的方法研究了其在不同组织和不同发育阶段的表达情况以及对保幼激素JH和蜕皮激素20E诱导的响应情况。结果表明，EcRB1和USP1的表达水平明显高于EcRA和USP2，并且EcRB1和USP1在中肠、表皮和脂肪体的表达模式几乎一致，而EcRA和USP2也具有相似的表达谱。4种受体中，EcRA对20E的响应最早，且诱导效应最为显著;其次是EcRB1和USP1。USP1不仅对20E有响应也对JH有响应。USP2对JH和20E都没有明显的响应。此外，我们还采用Far-western检测了两种EcR和两种USP之间的蛋白质互作，发现在离体条件下两种EcR和两种USP之间均存在蛋白相互作用。表达谱和蛋白质互作的结果表明，EcRB1和USP1可能组成最主要的蜕皮激素受体异源二聚体，而EcRA和USP2可能组成另外一对异源二聚体。
为研究micoRNA对蜕皮激素受体EcRA的调控，我们通过高通量测序检测了microRNA在斜纹夜蛾六龄幼虫、预蛹和蛹期中肠的表达情况，并结合生物信息学分析，预测出了三种可能调控EcRA的microRNA:mir-14-3p，mir-282-5p以及新预测出的mir6L-Mg-m0102_3p。应用细胞转染实验进一步证明，mir-14-3p可以显著抑制EcRA3UTR的双萤光素酶活性。这些结果表明，mir-14-3p可能调控蜕皮激素受体EcRA的表达。
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