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目的:探讨应用低密度蛋白质芯片技术检测骨性关节炎(osteoarthritis,OA)患者关节液和血清中基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)表达水平变化的方法,研究关节液、血清中MMP-13表达水平与软骨损伤程度之间的关系,以及通过关节镜手术并关节腔内注射外源性玻璃酸钠注射液后的软骨损伤患者关节液中MMP-13表达水平变化的研究。通过此研究有望建立一种低密度蛋白质芯片检测体系诊断早期软骨损伤,并可以从微观水平评价损伤软骨经临床手段治疗后软骨代谢改变的情况。此外还观察软骨损伤患者膝关节腔内注射玻璃酸钠注射液后的临床疗效。
方法:应用抗原抗体反应原理构建低密度蛋白质芯片,检测32例OA患者及24例正常人关节液、血清中MMP-13表达水平,并对比其蛋白质芯片荧光强度,以此通过半定量方法评价MMP-13在OA患者与正常人关节液、血清中表达水平的差异。另外,42例经Outerbridge软骨损伤评分法分为5组的软骨损伤患者,应用低密度蛋白质芯片检测各组患者在行关节镜手术前的关节液及在术后的第1、2、3、4周向关节腔内注射玻璃酸钠注射液后的关节液中MMP-13的荧光强度的变化,以此半定量的评价软骨损伤经关节镜手术及关节腔内注射玻璃酸钠注射液治疗后的关节液中MMP-13表达水平的变化。同时以非常好、好、稍好、不好四种程度要求患者自我评价以此观察临床症状改善情况。
结果:OA患者关节液中的MMP-13在蛋白质芯片上的荧光强度明显高于正常人关节液的荧光强度(P<0.001),OA患者血清中的MMP-13在蛋白质芯片上的荧光强度明显高于正常人血清的荧光强度(P<0.001);同组患者关节液中MMP-13在蛋白质芯片上的荧光强度明显高于其血清的荧光强度(P<0.001)。另外在检测软骨损伤严重组(Ⅳ度、Ⅲ度)的行关节镜手术及玻璃酸钠治疗后的第2周,关节液内MMP-13表达水平开始显著下降,并持续到第5周;软骨损伤较轻组(Ⅰ度)的关节液中MMP-13表达水平在第4、5周与术前的比较有统计学差异(p<0.05);在第5周时,软骨损伤严重组(Ⅳ度、Ⅲ度)关节液内MMP-13表达水平仍高于软骨损伤较轻组(0度、Ⅰ度)。应用玻璃酸钠注射液治疗一周时,42名患者中自觉症状明显改善的有19人,应用两周时自觉症状明显改善的共有28人,应用至五周时感觉明显改善的共有34人。
结论:构建的低密度蛋白芯片检测骨性关节炎患者关节液与血清中MMP-13明显高于正常人,应用低密度蛋白芯片检测经关节镜手术、关节腔内注射玻璃酸钠治疗软骨损伤严重的患者,其关节液内MMP-13表达水平从第2周开始较行关节镜术前关节液内MMP-13表达水平明显下降;与软骨损伤轻的组比较软骨损伤严重的关节液内MMP-13表达水平下降更明显。应用低密度的蛋白质芯片技术检测OA患者关节液及血清中MMP-13的表达水平,同时在跟踪检测经连续治疗后关节液内MMP-13表达水平的变化时,低密度蛋白质芯片具有一定的简便性、实用性的临床应用价值。从改善临床症状角度观察,患者在经关节镜手术后并行关节腔内注射玻璃酸钠注射液后,软骨损伤较轻的多在治疗的第一周、第二周效果明显,软骨损伤重的多在第三周后临床症状缓解明显。