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禽网状内皮增生症（Reticuloendotheliosis，RE）是由禽网状内皮增生症病毒（Reticuloendotheliosis Virus，REV）引起的以淋巴网状细胞增生为特征的肿瘤性病理综合征，已成为严重危害养禽业、继马立克氏病和禽白血病之后的第三类肿瘤性疾病。目前还没有用于该病免疫防治的商业化的疫苗。本研究对REVgp90基因进行密码子优化，并利用IL-2作为免疫佐剂，旨在研制安全、有效的DNA疫苗。
首先，通过基因合成的方法，按照鸡体内偏嗜的密码子，对gp90进行密码子优化，构建pVAX1-optigp90。间接免疫荧光和Western blot试验检测表明，gp90、optigp90基因均能在BHK中得到正确表达，且optigp90基因比gp90基因获得更高水平的表达。对2周龄SPF鸡通过肌肉注射质粒150μg/羽的免疫试验（首免后2周二免，间隔1周加强免疫，三免后1周攻毒）证明，gp90基因密码子优化可显著提高REVHLJ071株DNA疫苗诱导的保护性体液免疫和细胞免疫水平，增强免疫保护效果，三免后1周pVAX1-optigp90质粒免疫组的特异性抗体水平显著高于pVAX1-gp90质粒免疫组（P<0.05），pVAX1-optigp90质粒免疫组的淋巴细胞增殖反应OD450值和CD8+、CD4+T淋巴细胞百分含量均显著高于pVAX1-gp90质粒免疫组（P<0.05）。攻毒后8d进行病理组织学检查，两对照组心、肝、脾、肾和法氏囊均出现严重的病理变化，pVAX1-optigp90组病理变化极小。
为进一步探讨免疫佐剂对DNA疫苗免疫效果的影响，本研究将IRES插入到pVAX1多克隆位点，在IRES序列的上游和下游分别引入REV囊膜糖蛋optigp90基因及鸡IL-2基因，构建能同时表达optigp90和鸡IL-2基因的真核表达载体。间接免疫荧光及Western-blot试验检测表明，IL-2基因和optigp90基因均能得到正确表达。对2周龄SPF鸡通过肌肉注射质粒150μg/羽的免疫试验证明，pVAX1-IL2-IRES-optigp90质粒免疫组多诱导的保护性体液免疫、细胞免疫以及对病毒的攻击保护效果比其它质粒好。
总之，通过体外瞬时表达检测，IRES的上、下游插入的optigp90基因及鸡IL-2基因在BHK细胞中均得到正确表达，通过SPF鸡免疫试验可以看出，将REVgp90进行密码子优化以及加入IL-2作为分子佐剂均能提高REVDNA疫苗的免疫应答水平，并且与多载体共免疫相比，IRES融合表达的蛋白具有更多的优势。