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目的:
MicroRNAs(miRNAs)是一类高度保守的、小分子非编码的RNA,通过与mRNA调节或结合特定mRNA的蛋白质翻译过程来调控基因的表达。多项研究证实肿瘤组织miRNAs表达水平的变化与正常组织相比可以是特异性下调或上调,这一现象揭示miRNA在肿瘤发生、发展等过程中可能扮演着重要的角色[1]。本文就microRNAs在膀胱尿路上皮癌中的差异表达及意义进行了探讨。
方法:
随机对手术切除新鲜膀胱尿路上皮癌组织9例(参照WHO1973分级法病理分级,Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级各3例)及正常膀胱尿路上皮组织(3例)标本并保存于液氮罐中;取100mg新鲜组织样品,使用BioPulverizerTM冰冻粉碎组织,加1ml的RNA抽提试剂TRIzol(Invitrogen),使用Mini-Bead-Beater-16匀浆后抽提RNA;使用Nanodrop测定RNA在分光光度计260nm、280nm和230nm的吸收值,以计算浓度并评估纯度;用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性;用标记酶Hy3TM荧光基团标记RNA的探针在标准条件下和miRCURYTM芯片进行杂交;使用GenePix4000B芯片扫描仪及GenePix pro V6.0完成图像采集和数据分析;并对部分差异表达的MicroRNAs荧光定量RT-PCR验证。
结果:
Ⅰ级膀胱尿路上皮癌与正常膀胱粘膜上皮组织比较分析发现81个差异表达基因,其中40个上调,41个下调;Ⅱ级膀胱尿路上皮癌15个差异表达基因,其中9个上调,6个下调;Ⅲ级膀胱尿路上皮癌71个差异表达基因,其中32个上调,39个下调;在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级膀胱尿路上皮癌组织分别与正常膀胱粘膜比较所得的3组差异表达基因中,hsa-miR-29b-1*均共同上调,hsa-miR-300、hsa-miR-923均共同下调;hsa-miR-29b-1*、hsa-miR-300、hsa-miR-923经RT-PCR验证与microRNAs芯片分析结果一致。
结论:
膀胱尿路上皮癌与正常膀胱粘膜组织中存在差异miRNAs基因,这种miRNAs差异与膀胱尿路上皮癌的发生及发展密切相关;hsa-miR-29b-1*、bsa-miR-300、bsa-miR-9233个基因极可能是膀胱尿路上皮癌的肿瘤发生相关特异性miRNA基因。