论文部分内容阅读
目的 观察高糖条件下培养的大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial Cells, MCs)氧化应激水平以及二甲双胍(Metformin,Met)对其氧化应激的影响,探讨二甲双胍保护肾脏机制。方法将大鼠肾小球MCs置于体外培养,分组如下：①「正常对照(NC)组：DMEM液(Glu 5.6mmol/L)②「高糖(HG)组：DMEM液(Glu 25mmol/L)③「二甲双胍1组(Met 1组)：DMEM液(Glu 25mmol/L)+Met (0.5mmol/L)④「二甲双胍2组(Met 2组)：)MEM液(Glu 25mmol/L)+met(1.0mmol/L)⑤「二甲双胍3组(Met 3组)：DMEM液(Glu 25mmol/L)+met(2.0mmol/L)每组细胞培养48h后收集上清液和细胞。采用比色法测定上清液中脂质过氧化物丙二醛(Malondialdehydel,MDA)含量及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutaseSOD)活性；采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-RCR)方法测定MCs内烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate, NADPH)氧化酶的亚基p22phox及p47phox mRNA的表达。各个检测指标均设立6个重复组。结果(1)各组大鼠肾小球MCs上清液中SOD活性比较与NC组比较,HG组SOD活性明显下降(P<0.05),各二甲双胍组经不同浓度二甲双胍干预,SOD活性较HG组不同程度升高(P<0.05)。其中,Met1组与Met2组SOD活性无明显差异,但Met1与Met3组,Met2组与Met3组SOD活性均存在差异,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)各组大鼠肾小球MCs上清液中MDA含量比较与NC组比较,HG组MDA含量显著增高(P<0.05)。各二甲双胍组MDA含量均较HG组含量显著降低,但均高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。Met1组含量高于Met2组以及Met3组,差异有统计学意义(P<0.05)。但Met2组与Met3组MDA含量无明显差异。(3)各组大鼠肾小球MCs p22phox和p47phox mRNA表达水平的比较经高糖刺激后,HG组p22phox、p47phox mRNA表达较NC组明显增加(P<0.05)。不同浓度二甲双胍预先干预后,各二甲双胍组p22phox、p47phox mRNA表达量较HG组显著降低(P<0.05),但仍高于NC组。Metl与Met2组,Metl与Met3组,Met2与Met3组之间p22phox和p47phox mRNA表达均有差异,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)肾小球MCs p22phox表达水平与上清液SOD活性及MDA含量的相关性分析MCs内p22phox表达水平与上清液SOD活性呈显著负相关(r=-0.844,P<0.05),与MDA含量呈显著正相关。(r=0.911,P<0.05)(5)肾小球MCs p47phox表达水平与上清液SOD活性及MDA含量的相关性分析MCs内p47phox表达水平与上清液SOD活性呈显著负相关(r=-0.782,P<0.05),与MDA含量呈显著正相关(r=0.913,P<0.05)。结论1 高糖可增强体外培养的MCs P47phx、P22phoxmRNA表达,诱导其氧化应激2二甲双胍可抑制高糖诱导的体外培养的MCs P47phox、P22phoxmRNA表达,减轻其氧化应激,并具有一定的浓度依赖性。