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目的： 1）采用流式细胞术SP细胞分选法分离鉴定胰腺癌SP细胞符合胰腺癌干细胞特性并表达干性基因。 2）研究胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药性及吉西他滨对人胰腺癌CSC的富集作用。 3）研究低氧微环境下人胰腺癌细胞基本生物学性状，探讨低氧微环境对人胰腺癌CSC的调控作用。 方法： 1）选用人胰腺癌细胞系Bxpc-3、Panc-1、SW1990，采用流式细胞术SP分选法分离出SP细胞； 2）采用平板克隆实验、细胞分化实验、流式细胞仪细胞周期分析、Transwell法检测侵袭和迁移能力、裸鼠成瘤实验研究SP细胞亚群的基本生物学特性； 3）采用Real-Time qPCR法检测SP细胞亚群和非SP细胞亚群中OCT4、SOX2、Nanog、ABCG2、CD133、ALDH1的表达水平； 4）采用流式细胞术 SP分选法检测吉西他滨干预后的人胰腺癌 SP细胞比例及OCT4、SOX2、Nanog、ABCG2、CD133、ALDH1基因表达； 5）体外细胞低氧培养模拟体内低氧微环境，通过Western blot检测HIF-1α蛋白表达监测胰腺癌细胞的缺氧状态； 6）通过细胞生长形态、细胞生长曲线、细胞周期研究低氧微环境下胰腺癌细胞的基本生物学特性； 7）通过 Western blot检测 E-cadherin蛋白和Vimentin蛋白表达从而监测低氧微环境下胰腺癌细胞EMT； 8）采用Real-Time qPCR法检测低氧微环境下胰腺癌细胞中OCT4、SOX2、Nanog、ABCG2、CD133、ALDH1的表达。 结果： 1）人胰腺癌细胞系Bxpc-3、Panc-1、SW1990均含有SP细胞亚群，比例（％）分别是0.58±0.02，8.74±0.33，3.92±0.16； 2）胰腺癌细胞SP细胞亚群和non-SP细胞亚群克隆形成能力差异有统计学意义（P<0.05），SP细胞有更强的克隆形成能力；SP细胞具有增殖分化能力；SP细胞和非SP细胞亚群细胞周期分布差异有统计学意义（P<0.05），SP细胞更多处于静止期；SP细胞的侵袭和迁移能力均强于non-SP细胞（P<0.05）；SP细胞成瘤能力至少是非non-SP的100倍； 3）SP细胞和non-SP细胞亚群中OCT4、SOX2、Nanog、ABCG2、CD133、ALDH1的表达差异有统计学意义（P<0.05），SP细胞亚群OCT4表达/non-SP细胞亚群OCT4表达为123.8±12.89倍、SOX2为187.76±10.22倍、Nanog为45.36±3.44倍、ABCG2为1321±112.89倍、CD133为237.67±37.45倍、ALDH1为68.78±5.56倍； 4）SP细胞较非 SP细胞对吉西他滨有更强的耐受性，吉西他滨干预人胰腺癌细胞系后 SP细胞比例升高伴随OCT4、SOX 2、Nanog、ABCG2、CD133、ALDH1基因表达上调； 5）低氧微环境下HIF-1α蛋白表达上调； 6）低氧微环境下细胞生长形态差异明显，细胞核、细胞质及细胞膜形态均发生明显变化；细胞增殖较慢，细胞生长曲线无明显对数生长期；细胞周期分布差异有统计学意义（P<0.05），三株胰腺癌细胞多处于静止状态； 7）低氧微环境下E-cadherin蛋白表达下调、Vimentin蛋白表达上调，胰腺癌细胞更容易发生EMT； 8）低氧微环境下基因OCT4、SOX2、Nanog、ABCG2、CD133、ALDH1的mRNA表达上调（P<0.05）。 结论： 1）胰腺癌SP细胞具有胰腺癌CSC特性，流式细胞术SP分选法是分离胰腺癌干细胞的可靠方法； 2）胰腺癌细胞OCT4、SOX2、Nanog、ABCG2、CD133、ALDH1基因是胰腺癌干细胞的干性基因； 3）吉西他滨可以富集胰腺癌干细胞，通过检测胰腺癌干性基因OCT4、SOX2、Nanog、ALDH1、CD133和ABCG2表达，可以监测胰腺癌干细胞； 4）低氧微环境能够通过HIF-1α蛋白增强胰腺癌干细胞自我更新并产生异质性肿瘤细胞的能力。