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莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）、己烯雌酚(Diethylstilbestrol，DES)、恩诺沙星(Enrofloxacine，ENR)和环丙沙星(Ciprofloxacine，CPF)是4种在畜牧生产中常被非法添加或过量使用的兽药或饲料添加剂，由于其潜在的各种危害，大多数国家和地区已限定或禁止其在动物生产中的应用，因此建立高灵敏度的检测方法十分必要。时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)是近年来发展的一种新型免疫分析技术，具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点，适用于大规模样品的筛查。本文基于实验室前期制备的抗体及抗原，旨在研究建立上述4种兽药的TRFIA方法，并用于实际样品检测。主要结果如下：
(1)通过优化莱克多巴胺的TRFIA条件，所建立的RAC-TRFIA方法半抑制浓度(IC50)为0.33μg/L，线性范围(IC20-IC80)为0.075-2.13μg/L，灵敏度为0.05μg/L；该方法特异性强，与莱克多巴胺的结构类似物无明显交叉(＜2％)；方法对添加莱克多巴胺的猪尿、猪肝和饲料样品的回收率分别为97.31%-102.57%、80.36%-112.03%和70.32%-119.54%；分析内变异系数＜15%，分析间变异系数＜20%；所有实验试剂均可在4℃保存6个月以上，稳定性好；该方法检测结果与HPLC方法相比具有很高的相关性，R2=0.972。
(2)通过优化己烯雌酚的TRFIA条件，所建立的DES-TRFIA方法半抑制浓度(IC50)为0.04μg/L，线性范围(IC20-IC80)为0.01-2.56μg/L，灵敏度为0.01μg/L；方法特异性强，对己烯雌酚结构类似物及功能类似物无明显交叉反应(＜2%)；方法对添加己烯雌酚的鸡肉、鱼肉、猪肝和饲料样品的回收率分别为87.26%-99.53%、98.78%-110.31%、84.53%-90.50%和98.58%-104.47%；分析内变异系数与分析间变异系数均＜25%。所有实验试剂可在4℃保存4个月以上，方法具有一定的稳定性。该方法检测结果与HPLC方法相比具有很高的相关性，R2=0.972。
(3)通过优化恩诺沙星TRFIA条件，所建立的ENR-TRFIA方法半抑制浓度(IC50)为0.077μg/L，线性范围(IC20-IC80)为0.01-1.24μg/L，灵敏度为0.01μg/L；方法特异性强，对恩诺沙星结构类似物交叉反应均小于0.1%；方法对添加恩诺沙星的鸡肉、鱼肉、蜂蜜和牛奶样品的回收率分别为89.29%-120.05%、80.50%-113.88%、88.98%-112.01%和86.48%-99.63%；分析内变异系数和分析间变异系数均＜20%；所有实验试剂均可在4℃保存6个月以上，稳定性好。该方法检测结果与HPLC方法相比具有很高的相关性，R2=0.996。
(4)通过优化环丙沙星TRFIA条件，所建立的CPF-TRFIA方法半抑制浓度(IC50)为4.32μg/L，线性范围(IC20-IC80)为1.14-28.85μg/L，灵敏度为0.5μg/L；该方法由于氟喹诺酮类药物含有共同的喹诺酮萘啶环而存在一定的交叉反应；方法对添加环丙沙星的鸡肉、鱼肉、蜂蜜和牛奶样品的回收率分别为89.29%-120.05%、80.50%-113.88%、88.98%-112.01%和86.48%-99.63%；分析内变异系数与分析间变异系数均＜20%。所有实验试剂均可在4℃保存6个月以上，方法稳定性好。该方法检测结果与HPLC方法相比具有很高的相关性，R2=0.956。
本文所建立的莱克多巴胺、己烯雌酚、恩诺沙星和环丙沙星4种药物的时间分辨荧光免疫分析方法灵敏度和准确度高，可满足日趋严格的检测要求，能够应用于实际样品的分析检测，其中恩诺沙星和环丙沙星的TRFIA检测方法为国内首次建立。