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应用免疫调节分子增强抗肿瘤免疫反应是肿瘤治疗的重要策略。4-1BB信号通路作为共刺激途径，它既能提供共刺激信号激活T细胞，使T细胞活化、增殖和分泌细胞因子，同时它介导的反向共刺激信号诱导抗原呈递细胞活化、增殖分泌细胞因子。实验研究表明干预4-1BB共刺激途径可调节T细胞和APC的功能产生抗肿瘤免疫作用，为肿瘤的免疫治疗提供了新的靶点。但肿瘤的发生和逃避免疫监视机制是复杂的和多因素的，单独依靠4-1BB信号传导途径并不能彻底消除肿瘤细胞，特别是一些弱免疫原性和无免疫原性的肿瘤细胞，因此4-1BB信号转导途径和其他免疫调节方式联合应用，可以从不同方面增强免疫系统杀伤肿瘤细胞的功能。本研究拟开展携带4-1BB单链抗体(anti-4-1BBscFv)基因的重组腺病毒介导的肿瘤基因治疗研究，同时探索联合低剂量环磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)以抑制调节性T细胞(regulatoryTcells，Treg)，进一步增强抗肿瘤免疫功能的新途径。
应用AdEasTM系统成功构建了携带anti-4-1BBscFv基因的重组非复制型腺病毒(Ad-4-1BBscFv)，该病毒能有效感染小鼠肿瘤Hepa1-6和TC-1细胞，并在细胞膜表面表达anit-4-1BBscFv。在体外实验中Ad-4-1BBscFv能刺激小鼠脾细胞增殖，说明其具有生物活性。而MTS实验表明Ad.4-1BBscFv在高感染系数和长时间作用下对人和小鼠的肿瘤细胞(A549、PLC/PRF/5、Hepa1-6和TC-1)活力没有明显影响，说明Ad.4-1BBscFv对肿瘤细胞没有直接杀伤作用。在动物实验中瘤内注射Ad.4-1BBscFv，与对照病毒比较能延缓荷Hepa1-6和TC-1肿瘤小鼠肿瘤生长，其作用与增加分泌IFN-γ的T细胞数量和诱导淋巴细胞在肿瘤局部浸润，改善肿瘤周围免疫微环境，提高抗肿瘤免疫有关。而联合应用Ad.4-1BBscFv和CTX，较Ad.4-1BBscFv和CTX分别单独应用能明显延长小鼠生存期，抑制肿瘤生长，甚至完全消退肿瘤，这是CTX抑制Treg细胞，增强了4-1BBscFv抗肿瘤免疫作用。本研究为新型肿瘤免疫基因治疗提供了理论和实验依据。