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第一部分奥曲肽-紫杉醇偶联物的合成 目的:合成纯化的奥曲肽-紫杉醇偶联物。 方法:与江苏省药物研究所进行药物合作合成，采用二苯基N-琥珀酰亚胺磷酸酯(SDPP)作为催化剂，先合成N-羟基丁二酰亚胺紫杉醇丁二酸酯，再与游离奥曲肽偶联得到奥曲肽-紫杉醇偶联物。 结果:成功合成得到纯化的奥曲肽-紫杉醇偶联物，收率60％，纯度为98％，其结构经MS确证，ESI-MS(m/z):1954[M+H]+。 结论:采用SPDD作为催化剂，能有效合成紫杉醇丁二酸NHS偶联物，并可以用于与奥曲肽偶联，这可作为奥曲肽-紫杉醇偶联物合成的新方法。 第二部分奥曲肽-紫杉醇偶联物抑制A2780/Taxol细胞生长的体外实验研究 目的:体外环境下研究奥曲肽-紫杉醇偶联物对人耐紫杉醇卵巢癌细胞A2780/Taxol的生长抑制作用，及对细胞凋亡的影响。 方法:1）外购A2780/Taxol细胞并传代培养，采用细胞免疫化学法鉴定细胞表面生长抑素受体2亚型(somatostatin receptor2，SSTR2)的表达;2）奥曲肽-紫杉醇偶联物以0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/ml6种浓度分别加入A2780/Taxol细胞培养液中，用CCK-8法分析各种浓度药物作用24、48、72小时对卵巢癌细胞增殖的影响;3）应用流式细胞仪检测偶联物(10.0ug/ml)对A2780/Taxol细胞凋亡的影响。 结果:1）细胞免疫化学法结果显示A2780/Taxol细胞表面表达SSTR2;2）奥曲肽-紫杉醇偶联物对A2780/Taxol细胞增殖的影响:偶联物在2.5μg/ml浓度时即对A2780/Taxol细胞有增殖抑制作用，抑制作用随浓度的增加呈增强趋势，在浓度≥10μg/ml时，作用时间在0-72h内，出现明显的时间依赖性(P＜0.05);3)流式细胞仪检测细胞凋亡:结果显示偶联物具有诱导细胞凋亡的作用，不同浓度组与对照组相比差异均有统计学意义，偶联物诱导细胞凋亡的作用明显高于紫杉醇及奥曲肽单独作用，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论:1）体外环境下，奥曲肽具有促进A2780/Taxol细胞凋亡的作用。2）奥曲肽-紫杉醇偶联物可抑制A2780/Taxol细胞的增殖，作用呈时间剂量依赖性。 第三部分奥曲肽-紫杉醇偶联物对A2780/Taxol细胞株耐药基因和蛋白表达的影响 目的:在第二部分实验结果的基础上，进一步研究奥曲肽紫杉醇偶联物在体外环境下对A2780/Taxol细胞SSTR2、MDR1、VEGF mRNA表达的影响，探讨偶联物体外增加紫杉醇敏感性，逆转A2780/Taxol细胞耐药性的可能机制。 方法:1）根据CCK-8结果选取中低毒剂量的奥曲肽-紫杉醇偶联物，浓度分别为5.0、10.0、20.0ug/ml，加入A2780/Taxol细胞培养液中，作用48h后收集细胞，采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测不同浓度奥曲肽-紫杉醇偶联物作用后A2780/Taxol细胞SSTR2、MDR1、VEGF mRNA表达的变化;2）上述浓度奥曲肽-紫杉醇偶联物处理细胞48h后，采用Western Blot方法检测细胞SSTR2、MDR1和VEGF蛋白表达的变化。 结果:1）在体外环境下，不同剂量奥曲肽-紫杉醇偶联物（5.0、10.0、20.0μg/ml)作用48小时后，各组间均检测到有SSTR2 mRNA表达，但随着浓度的增高，SSTR2 mRNA未见明确增高或降低的趋势，与对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05)。与对照组相比，MDR1和VEGF mRNA均有不同程度的下降，且偶联物浓度越高，其扩增量均越低，呈现浓度剂量依赖关系，各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05）;2）不同剂量奥曲肽-紫杉醇偶联物(5.0、10.0、20.0μg/ml)作用48小时后，与对照组相比，SSTR2三个浓度灰度值均低于对照组，有显著统计学差异(P＜0.05)，且偶联物浓度越高，其灰度值越低，呈现浓度剂量依赖关系，各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05）。MDR1及VEGF灰度值也随着偶联物浓度的升高而降低，各组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论:体外环境下，奥曲肽-紫杉醇偶联物可显著下调A2780/Taxol细胞MDR1 mRNA及VEGF mRNA的表达，呈浓度依赖性;奥曲肽-紫杉醇偶联物同时可下调A2780/Taxol细胞SSTR2、MDR1及VEGF蛋白表达，呈浓度依赖性，提示奥曲肽逆转A2780/Taxol细胞耐药性可能与下调SSTR2蛋白、MDR1和VEGF基因及蛋白表达有关。