【摘 要】
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亲和-超滤技术结合了生物亲和作用的高选择性和膜分离技术快速、易放大的优点,具有广阔的工业化前景。本文以葡聚糖T2000为载体基质,通过对其进行环氧活化,耦联亲和配基亚氨
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亲和-超滤技术结合了生物亲和作用的高选择性和膜分离技术快速、易放大的优点,具有广阔的工业化前景。本文以葡聚糖T2000为载体基质,通过对其进行环氧活化,耦联亲和配基亚氨基二乙酸(IDA),螯合铜离子,制备出水溶性亲和-超滤载体并应用于重组蛋白AxCesD的分离。本论文的主要研究内容及实验结果摘要如下:1、葡聚糖T2000的环氧活化。通过研究碱处理浓度、碱处理时间、环氧氯丙烷浓度、超声场强度、反应时间、反应温度,得到了葡聚糖T2000环氧活化的最佳条件:将浓度为4%的葡聚糖T2000在浓度为0.1mol/L的NaOH溶液中反应30min后,得到碱活化葡聚糖T2000,再与4%(V/V)的环氧氯丙烷,在频率为130kHz、功率为500W的超声条件下,30℃反应4h,得到环氧活化载体,其环氧基浓度为3.3472mmol/g。2、水溶性亲和-超滤载体的合成。研究了环氧活化葡聚糖T2000与亲和配基亚氨基二乙酸(IDA)连接及螯合铜离子的方法与条件:在30℃、频率为130kHz、功率为500W的超声条件下在反应1小时,与环氧葡聚糖T2000耦联的IDA达到饱和,进一步螯合铜离子后,得到水溶性亲和-超滤载体,且载体螯合铜离子量为2.5806 mmol/g。3、应用红外光谱分析环氧活化葡聚糖T2000。在波数1270cm-1与870cm-1处其具有环氧基的特征吸收峰;经高效凝胶色谱分析得到与亲和配基耦联的亲和-超滤载体分子量在88kD-500kD。4、用柱层析分离纯化获得重组蛋白AxCesD,研究了水溶性亲和-超滤载体的分离特性。水溶性亲和-超滤载体对重组蛋白AxCesD的平均吸附率为97.36%,平均洗脱率为95.44%。用该载体分离细胞原液中的重组蛋白AxCesD,经SDS-PAGE检测,可得到纯度较高的重组蛋白AxCesD。
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