COX-2 shRNA对大鼠肝星状细胞肾上腺素受体表达的影响

• 作 者: 盛尧慧
• 机 构: 南华大学
• 出 处: 南华大学
• 发表日期: 2011年01期
• 关键词: COX-2 shRNA β1-AR β2-AR β3-AR 肝星状细胞

目的研究COX-2 shRNA对大鼠肝星状细胞肾上腺素受体表达的影响。方法1应用已构建的带有荧光的三条不同COX-2 shRNA片段的质粒,通过脂质体Liplofectamine^TM 2000转染大鼠HSC,荧光显微镜下评估细胞的质粒转染效率。2分别在转染HSC后24h、48h、72h提取RNA,用RT-PCR法检测肝星状细胞中COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR的mRNA表达,同时筛选出三条COX-2 shRNA序列中沉默效果最好的序列。3用沉默效果最好的COX-2 shRNA片段转染肝星状细胞,免疫细胞化学法检测肝星状细胞中COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR的蛋白表达。4计量资料数据均以均数±标准差（（x|-）±S）表示,多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,组内比较采用LSD-t检验,用SPSS17.0软件进行统计分析,P﹤0.05作为差异显著性标准。结果1 COX-2 shRNA三条序列转染HSC后的24h、48h、72h三个时间段,在荧光显微镜下观察到HSC内均有荧光表达,而空载组和空白对照组无荧光表达。2 RT-PCR法证实HSC可表达COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR mRNA,三条片段的COX-2 shRNA在转染HSC后均可不同程度的减少COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR mRNA的表达,其中以COX-2 shRNA序列1组转染HSC后的72h作用最明显。3免疫细胞化学法证实HSC可以表达COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR蛋白,且COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR在HSC中的分布基本一致,主要分布于细胞膜,细胞浆也有少量表达,在COX-2 shRNA序列1组转染HSC后的72h,COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR蛋白表达减弱最明显。结论1 HSC上可表达COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR。2 COX-2 shRNA能够沉默大鼠HSC中COX-2、β₁-AR、β₂-AR、β₃-AR的mRNA及其蛋白的表达,抑制COX-2可减少HSC上肾上腺素受体的表达。