论文部分内容阅读
目的：脓毒症的早期诊断及有效的治疗至关重要，目前人们对于相关的分子机理及分子标志物的认识还很有限。本研究应用基因芯片高通量的检测技术，研究脓毒症的miRNA表达谱，筛选出脓毒症组和正常对照组之间差异表达的miRNA，筛选并验证可用于诊断、预测脓毒症预后的血清miRNA及其相关靶基因，为miRNA在脓毒症中的功能研究提供理论基础，为临床脓毒症的防治提供新的研究思路。 方法：收集我院呼吸与危重症医学科在2015年1月到2015年12月期间收治的汉族的脓毒症患者和健康体检患者的外周血液标本和一般基本资料，包括年龄、生命体征（体温、呼吸、脉搏和血压）、CRP、PCT、动脉血气分析、血常规、肾功、肝功、凝血功能的结果以及24小时尿量、Glass昏迷评分和既往病史。用Trizol法提取总RNA，使用Nanodrop1000紫外分光光度仪鉴定总RNA的质量，筛选出符合基因芯片杂交质控标准的血液样品（每组各6例）。使用miRNA完全标记和Hyb工具包的试剂盒，样品经Cyanine3-pCp连接到RNA3′端的荧光标记后与人类miRNA探针的基因芯片进行杂交，杂交洗涤过后的芯片用Agilent Feature Extraction软件对杂交图片进行分析，用GeneSpring软件处理分析数据,筛选出在脓毒症组和正常对照组之间差异表达的miRNA（以P值＜0.05和FC(abs)值＞2为条件），用TargentScan软件对其可能的靶基因进行预测，用DAVID工具对靶基因相关的功能预测。 结果：脓毒症组和正常对照组中差异表达的miRNA有305个，其中在脓毒症组中上调miRNA有129个，下调miRNA有176个。上调基因中差异表达10倍以上的共有5个，分别是：miRNA-6778-3p、miRNA-6514-3p、miRNA-3591-3p、miRNA-4446-5p和miRNA-34b-3p；下调基因中差异表达10倍以上的有1个，是miRNA-625-5p；在差异表达5倍以上的有5个，分别是miRNA-6756-5p、miRNA-505-5p、miRNA-130b-3p、miRNA-1914-3p和miRNA-501-5p。我们发现的显著差异表达miRNA目前还未有报道与脓毒症有关。 结论：基因芯片技术是一种有效的高通量分析脓毒症相关miRNA表达谱的检测方法。通过初步的基因芯片分析，在脓毒症中发现异常表达的miRNA有305个，其中显著差异表达的miRNA有18个，这些有可能成为新的脓毒症特征性分子生物学标志物。生物信息学分析软件预测差异表达的靶基因，则为进一步研究认识脓毒症发生发展的分子生物学机制，寻找鉴定临床诊治相关的分子标志物奠定基础。