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热疗作为肿瘤的重要治疗手段，正引起人们越来越多的关注。由于血流灌注不足，肿瘤组织特别是实体瘤中央常处于一种低氧和低PH值的环境中，使肿瘤细胞比正常细胞对热疗更加敏感。实验研究和临床观察证明热疗联合化疗、放疗和免疫治疗等可以产生明显的协同作用。目前认为热疗治疗肿瘤的机理可能是高热做为一种应激因素，可以增强细胞凋亡基因的表达，导致肿瘤细胞凋亡。一氧化氮(Nitric Oxide，NO)是一种具有多种生理功能的信息分子，参与肿瘤的发生、发展和转移过程。NO在肿瘤生物学方面可能有双重作用。一方面，NO既是巨噬细胞、内皮细胞等杀伤肿瘤细胞的效应分子，可以诱导肿瘤细胞凋亡；另一方面，又可通过促进血管生成，增加血流量等方式促进肿瘤的生长。目前认为NO对肿瘤作用的两面性主要由NO的浓度决定。通过给予外源性的NO供体，则可以干预体内NO水平，从而达到治疗肿瘤的目的。然而，热疗联合一氧化氮供体能否对肿瘤治疗起到协同作用，机理如何，尚不清楚。本研究通过观察热疗联合一氧化氮供体硝酸异山梨酯(Isosorbide dinitrate，ISDN)，体内对小鼠Hep-A肿瘤生长、转移的影响；体外条件下对肿瘤细胞增殖、趋化、贴壁能力的影响以及诱导肿瘤细胞凋亡的效果，以此探索热疗联合硝酸异山梨酯抑制实验性肿瘤的疗效及可能机理，为临床寻找有效的肿瘤治疗方法提供实验依据。 实验方法： 1．热疗联合硝酸异山梨酯(ISDN)体内对小鼠Hep-A肿瘤的作用生长良好的Hep-A肿瘤细胞接种NIH小鼠足垫制备荷瘤动物模型。实验分4组，每组12只小鼠。(1)对照组：生理盐水小鼠腹腔注射。(2)ISDN组：小浙江大学硕士学位论文2004鼠热疗前1天ISDN 100 mg/kg连续腹腔注射给药。(3)热疗组:小鼠肿瘤43℃水浴加热25分钟。(4)热疗+IsDN组。治疗后7天和14天观察小鼠肿瘤生长情况，胭窝淋巴结及腹水转移情况，镀铜福还原法测定小鼠尿液内NO浓度。2.热疗联合硝酸异山梨酷体外对H即一A肿瘤细胞的抑制作用 生长良好的HeP一A肿瘤细胞分为4组，每组4个复孔。(l)对照组:未做任何处理的HeP一A细胞。(2)IsDN组:培养液中加入IsDN至终浓度o.lmg/ml。 (3)热疗组:43aC水浴肿瘤细胞25min。(4)热疗+ISDN组:培养液中加入ISDN后常规培养2h，然后水浴加热。分别采用MTT法，改良Boyden小室法，24孔板计数法比较实验处理后HeP一A肿瘤细胞增殖能力、游走能力和贴壁能力的改变。3.热疗联合硝酸异山梨酷体外诱导HeP一A肿瘤细胞凋亡的作用 生长良好的HeP一A肿瘤细胞分组及实验处理同2。分别采用扫描电镜、透射电镜和流式细胞仪定性、定量观察Hep一A细胞凋亡:使用Westem blot法检测实验处理后Bcl一2蛋白表达。实验结果:1.热疗联合硝酸异山梨酷对小鼠HeP一A肿瘤生长、转移的影响 IsDN组、热疗组、热疗+I SDN组小鼠肿瘤体积和淋巴结、腹水转移率明显低于对照组(P<0.05)，而热疗+ISDN组肿瘤体积小于其他各组(p<0.05)，肿瘤转移率显著低于对照组(p<0.01)。ISDN组、热疗+I SDN组小鼠尿液NO浓度高于对照组和热疗组(p<0.05)。2.热疗联合硝酸异山梨酷对HeP一A细胞增殖、游走、贴壁能力的影响 IsDN组、热疗组和热疗+I SDN组均可明显降低HeP一A细胞增殖、游走和贴壁能力(p<0.05)，热疗+工SDN组的抑制作用较其他各组更显著(p<0.05)。3.热疗联合硝酸异山梨酷诱导HeP一A细胞凋亡的作用 扫描和透射电镜观察可见各实验组细胞表面微绒毛明显减少或消失、胞膜发泡、细胞固缩和核染色质浓缩边集，并出现凋亡小体，热疗+工SDN组的凋亡细胞数量更多。相同时间点热疗+ISDN组诱导 HeP一A细胞凋亡率高于ISDN组和热疗组。各实验组均使Bcl一2蛋白表达下调。浙江大学硕士学位论文2004结论 本研究发现，热疗联合一氧化氮供体硝酸异山梨酷在体内可以抑制小鼠HeP一A肿瘤的生长转移，体外可以抑制肿瘤细胞的增殖、游走和贴壁能力，具有一定的协同作用，其机制可能与下调Bcl一2蛋白表达，诱导HeP一A肿瘤细胞凋亡相关。