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在哺乳动物体细胞克隆中，从供体细胞制备，受体卵母细胞的培养和去核，重构胚的构建、激活和培养，胚胎移植直到胎儿出生，这个过程中的每个技术环节都会影响克隆效率。而其中，供体细胞和受体细胞的制备以及重构胚构建和培养占有最重要的地位。为提高核移植效率，研究者们曾尝试了很多方法来改善供体细胞和重构胚的培养条件，比如在供体细胞培养液中添加甲基化酶抑制剂，乙酰化酶抑制剂，在重构胚中添加维生素 E，谷胱甘肽等。本试验主要从供体细胞的选择，准备和处理，利用β-ME处理体外培养的重构胚方面进行研究，得到主要研究结果如下： 1.三种细胞系的建立及MTT（3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐）测定细胞活力 荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(BMec)，荷娟杂交牛耳组织成纤维细胞(HJF)的和黄牛耳组织成纤维细胞(YCF)的离体培养。MTT法分别测定三种体细胞的第2，6，13，20代细胞发现：第2和第6代细胞的增殖和生长状况显著比13和20代细胞的要好(P<0.05)，特别是第6代细胞(P<0.01)。 2.β-巯基乙醇(β-ME)处理对三种细胞活力的影响 用含β-ME分别为0、50、100、150μmol/L的培养液对三种细胞进行处理，然后用MTT法测定OD值，结果显示：添加β-ME100μmol/L时，MTT-OD值显著高于其他组(P<0.05)。说明在此浓度下，荷娟杂交牛耳组织成纤维细胞的活性最高，增殖速度最快。 3.β-ME处理对三种细胞抗氧化能力的影响 用含β-ME分别为0、50、100、150μmol/L的培养液对三种细胞进行处理，然后用试剂盒测定GSH-Px、SOD、CAT、MDA、T-AOC五种抗氧化指标，结果显示：β-ME浓度为100μmol/L时，GSH-Px、SOD、CAT、T-AOC浓度显著升高(P<0.05)， MDA值显著下降(P<0.05)，说明添加β-ME可以提高细胞的抗氧化能力。 4.β-ME对体细胞克隆胚胎的影响 血清饥饿诱导荷娟杂交牛耳组织成纤维细胞后，设三个试验：第一组，正常培养情况下的荷娟杂交牛耳组织成纤维细胞为供体进行核移植，重构胚培养液中不添加β-ME，作为空白对照。第二组，正常培养情况下的荷娟杂交牛耳组织成纤维细胞作为供体进行核移植，重构胚培养液中添加同浓度的β-ME。第三组，用含β-ME100μmol/L的培养液处理供体细胞24h，再进行核移植，重构胚培养液中添加同浓度的β-ME。结果显示：第二和第三组的卵裂率和囊胚率显著高于第一组(P<0.05)，而第二和第三组之间差异不显著(P>0.05)，但从数据可以看出，供体细胞经过β-ME处理后得到的卵裂率和囊胚率最高。 因此，可以认为，在本实验条件下，培养液中添加β-ME能够提高细胞的活性，在重构胚的培养液中添加β-ME可以提高核移植的效率。