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目的：探索人类风湿关节炎滑膜细胞原代培养的方法，并利用SMART(switching mechanism a5end of RNA transcript)技术，构建人类风湿关节炎滑膜细胞cDNA文库，为筛选和鉴定类风湿关节炎特异性及相关性抗原打下基础。
方法：取滑膜切除术后的类风湿关节炎患者滑膜组织，采用酶消化法进行细胞原代培养。从人类风湿关节炎滑膜细胞中提取总RNA，逆转录合成单链cDNA，再经长距离PCR合成双链cDNA；该产物经蛋白酶K消化、SfiI酶切后，经CHROMA SPIN-400柱分级分离，回收500bp以上的cDNA片段，并与载体λTriplEx2噬菌体连接，进行体外蛋白包装即构建成原始cDNA文库，测定原始文库的滴度，进行蓝白筛选以确定文库重组率，然后将文库进行扩增并鉴定库容量。
结果：成功进行人类风湿关节炎滑膜细胞原代培养。构建的原始cDNA文库滴度约为6.7×104 pfu/ml，重组率为85％，扩增后文库滴度为2.63×106pfu/ml，重组率为89％。
结论：采用酶消化法进行人类风湿关节炎滑膜细胞原代培养简便易行，成功率高，具有省时、经济、有效的特点。构建人类风湿关节炎滑膜细胞cDNA文库滴度较低，为达到筛选的要求，还需进一步改进方法，提高文库滴度。