核酸适体的体外筛选及超氧化物歧化酶模拟

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生物无机化学是无机化学和生物学交叉而产生的新兴学科。本论文工作隶属于该领域,并从以下两个方面开展工作:1)给定金属化合物寻找与之有选择性特异作用的分子;2)给定分子,寻找与之有特定作用的金属化合物。在第一个方向我们试图利用体外筛选技术找出与特定金属有选择性特异作用的DNA分子。另外,顺铂作为广泛使用的抗肿瘤药物,其作用靶分子为DNA,但它对DNA的序列选择性目前还不清楚。如果能够筛选出顺铂的特定DNA适体,对了解铂类抗癌药物作用机理和该类抗癌药物的设计都有指导意义。以核磁共振为主要手段,探讨了金属和筛选出的DNA适体之间的相互作用。在第二个方向,我们以超氧自由基为对象,力图找出对,其有良好催化歧化活性的锰超氧化物歧化酶模拟物,并为药物开发奠定基础。 本论文共分为以下几个章节: 第一章简要介绍了体外筛选、DNA三维溶液结构测定、锰超氧化物歧化酶模拟物等方面的研究背景和基本原理,并重点介绍了如何用NMR方法确定未标记DNA的三维结构。 第二章中利用体外筛选技术筛选与顺铂选择性结合的特定。DNA适体。化学合成起始随机DNA库与顺铂反应后,用聚丙烯酰胺凝胶电泳对有作用的DNA进行分离,从中提取出能够与顺铂选择性特异结合的DNA。对提取出的DNA利用PCR技术进行扩增。对扩增后的DNA再重复进行筛选。通过十一轮的体外筛选已得到对顺铂有一定识别能力的DNA适体。 第三章力图利用核磁共振方法研究DNA分子17ET3与pb<2+>反应前后结构变化。购买的17ET3用反相高效液相色谱提纯并用凝胶电泳和毛细管电泳的方法检测提纯效果。变温核磁图谱显示17ET3的熔融温度比17ET3和pb<2+>加和物要高,得出结论,pb<2+>的加入激活了17ET3的活性位点。从加入pb<2+>前后一维和二维图谱比较可看出,除了很小一部分的峰外,大部分峰的位置并没有变化这说明Pb<2>+与17ET3作用后未显著地引起后者溶液结构的变化,该现象进一步证明了核糖核酸rA作为切割位点的重要性。 第四章的研究对象是锰超氧化物歧化酶模拟物。合成了三个含吡啶基的配体和一个六配位锰(III)[Mn(bpb)(H<,2>O)Cl]配合物,其中H<,2>bpb为N,N’-(1,2-亚苯基)二(吡啶-2-酰胺),并用X-射线单晶衍射测定了它们的晶体结构。从循环伏安数据可看出[Mn(bpb)(H<,2>O)Cl]经历一个可逆的单电子氧化还原过程。用核黄素-蛋氨酸-氮蓝四唑实验研究了[Mn(bpb)(H<,2>O)Cl]的催化超氧化物歧化活性,结果表明配合物有着较高的SOD活性,IC<,50>值为2.93μM。
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