耐盐苯酚降解菌的筛选鉴定及其降解特性研究

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从某油田附近土壤中分离出一株以苯酚为唯一碳源的菌株JDD1H,采用形态观察、生理生化实验及16S rDNA序列分析等手段对菌株进行了鉴定。研究了该菌株在含盐环境下的生长特性,优化了菌株降解苯酚的工艺条件,考察了外加碳源、氮源和表面活性剂对苯酚降解效果的影响,探讨了菌株降解底物的广谱性和生长动力学规律,并对该菌株的苯酚羟化酶部分基因进行克隆。结果表明,菌株JDD1H为红球菌属(Rhodococcus sp.),该菌株能耐受5%盐度(NaCl),适宜生长的温度范围为3040℃、pH范围为68,重金属离子Ag+、 Fe3+、Ni2+、 Co2+和Cu2+对JDD1H的生长均有强烈的抑制作用,抑制作用大小依次为Ag+> Fe3+> Ni2+> Co2+> Cu2+。菌株对苯酚的降解工艺优化结果表明,菌株JDD1H降解苯酚的适宜条件为:盐度05%、pH为68、温度3040℃、投菌量为5%,在此条件下,浓度低于300mg/L的苯酚在2472h内可被完全降解,当苯酚初始浓度为400mg/L时,降解效率下降,当苯酚初始浓度大于500mg/L时,苯酚基本不被降解。外加碳源物质葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇和淀粉在502000mg/L浓度范围内,对苯酚的降解均表现出明显的促进作用,外加碳源乙酸钠在浓度小于2000mg/L时,可促进苯酚降解,而当浓度高于2000mg/L时,却对苯酚的降解产生抑制作用。外加氮源蛋白胨、酵母膏和尿素对苯酚降解有显著的促进作用,当蛋白胨、酵母膏浓度达到为500mg/L、尿素浓度为1500mg/L时,促进作用趋于稳定。无机氮源NH4Cl和(NH4)2SO4苯酚降解也有一定促进作用,但无机氮源对苯酚降解的促进作用远小于有机氮源。浓度为501000mg/L的吐温-80(TW-80)对菌株降解苯酚具有抑制作用,抑制作用随浓度的升高而减弱,当TW-80浓度介于15002000mg/L时,则对苯酚的降解产生促进作用。浓度为20500mg/L的CTAB均对苯酚的降解产生强烈的抑制作用,使苯酚基本不被降解。菌株降解底物的广谱性研究结果表明,菌株JDD1H在含5%NaCl的培养液中对三种取代酚2-硝基酚、2-氯酚及邻羟基苯甲酸均具有一定的降解潜力,7d内三种取代酚的降解效率分别为21.3%、49.55%和38.1%。菌株的动力学研究结果表明,苯酚初始浓度低于200mg/L时,菌株的比生长速率随苯酚浓度的升高而迅速升高,当苯酚初始浓度为200600mg/L时,比生长速率随浓度的增加而显著下降。Haldane model能较好地描述菌株JDD1H的生长动力学规律,动力学参数μmax、Ks和Ki分别为0.16h-1、322.33mg/L和67.65mg/L。本研究以苯酚羟化酶保守序列为引物,扩增出目的条带,证实了JDD1H基因组DNA中苯酚羟化酶基因片段的存在。基于苯酚羟化酶部分基因序列推断的氨基酸序列发育树分析表明JDD1H苯酚羟化酶部分基因与Pseudomona sp,Arthrobacter sp.的苯酚羟化酶部分基因在氨基酸水平上具有密切的系统发育关系,而且JDD1H苯酚羟化酶部分基因与不同菌种的苯酚羟化酶基因同源性存在差异性,表明苯酚羟化酶基因来自于共同的起源,同时在进化的过程中又演变形成不同的苯酚羟化酶基因。
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