论文部分内容阅读
目的：中枢神经系统损伤如多发性硬化等疾病中发现膜联蛋白1 (Annexin 1,ANXA 1)表达上调。本试验应用大鼠视网膜神经节细胞转化细胞系(RGC-5) ,旨在探讨ANXA 1是否参与青光眼相关的视网膜神经节细胞凋亡及Act-26对RGC-5凋亡的作用。
方法:10％FCS DMEM培养液培养的RGC-5细胞，间接免疫荧光标记ANXA 1,观察其在RGC-5细胞内的表达及分布。无血清DMEM培养液培养的RGC-5细胞，通过western blot及RT PCR分别观察0天、2天、4天时ANXA 1及凋亡相关因子caspase3, bax以及bcl-2的蛋白及mRNA表达水平。选择ANXA1表达变化比较明显的时间点加入ANXA 1来源多肤Act-26，浓度分别为3UM, lOUM,30UM。加入多肤后，检测正常组、3UM组、lOUM组、30UM组、PBS对照组、ANXAI多克隆抗体组RGC-5的凋亡比例，及凋亡因子caspase 3,bax和bcl-2的表达情况。
结果:通过间接免疫荧光方法显示，ANXA 1主要在RGC-5细胞内表达，并主要在胞浆内分布。与正常培养的RGC-5相比，无血清培养RGC-5细胞中，Annexin 1,caspase3, bax蛋白及RNA表达上调，bcl-2蛋白及RNA表达降低，且这种改变呈时间依赖性。选择无血清培养2天作为观察点，加入干扰因素，通过westernblot及RT-PCR检测，发现与损伤组相比，凋亡因子caspase3, bax表达减低，bcl-2表达升高，RGC-5凋亡比例降低，且呈Act-26剂量依赖性。
结论:Annexin 1主要分布于RGC-5细胞的胞浆，可能参与了无血清培养诱导的RGC-S凋亡损伤过程。Act-26可以通过抑制诱导凋亡因子，促进凋亡抑制因子表达改善RGC-5的损伤，体外观察具有视网膜神经节细胞保护功能。