离子液体用于毛细管电泳——非接触电导法分离检测蛋白质的研究

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本文采用不同链长的咪唑离子液体丁基、辛基和十二烷基取代的咪唑作为酸性背景电解质(BGE)的添加剂,研究了离子液体碳链长度对蛋白质毛细管电泳分离的影响。以溶菌酶、人血清蛋白、转铁蛋白、肌红蛋白、胰蛋白酶抑制剂、牛血红蛋白和过氧化氢酶为模型蛋白,并用电容耦合非接触电导检测器(C4D)进行检测。实验显示,蛋白质的分离度随着取代烷基链长的增长而增加。采用溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑([C12MIm]Br)为BGE添加剂,研究了BGE种类及浓度、pH、添加剂浓度和C4D参数对分离的影响,结果显示它们的变化对蛋白质的检测灵敏度和分离效果具有显著的影响。醋酸BGE浓度为200mM,[C12MIm]Br添加剂浓度为30μM,C4D激励频率为75 kHz,激励电压9.8 V时,分离和检测效果最佳。由于离子液体浓度远远低于临界胶束浓度,故本方法基于毛细管区带电泳。对蛋白质淌度、离子液体淌度,EOF和内标物淌度的研究显示蛋白质与离子液体的相互作用是蛋白质分离度提高的主要原因。BGE中加入微摩尔量级的离子液体具有以下优点:⑴提高了检测灵敏度;⑵使减少蛋白质在毛细管壁的吸附,从而提高蛋白质回收率;⑶通过离子液体与蛋白质间存在的强相互作用提高了分辨率;⑷分离了胰蛋白酶抑制剂、牛血红蛋白和过氧化氢酶的亚基。在pH2.5的条件下,分离在18分钟内完成,检测限为0.7-9.4μg mL-1(34.8-141.1nM)。除此之外,通过反复摸索建立了较好的电渗控制方法,即通过严格控制电泳前的各溶液冲洗时间可以得到较稳定的EOF,并通过改变BGE中离子液体浓度的大小可以使EOF反向以及随时调节其大小。该方法成功用于人血清样品中的蛋白质分析,表明新建立的毛细管电泳-非接触电导法适用于复杂样品中蛋白质的灵敏检测。
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