【摘 要】
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从pHR11上用HindⅢ酶切下5.9kb的吸氢酶的结构基因和调节基因(hup).载体pIJ2925用HindⅢ酶切后.与上述回收片段酶连,转化大肠杆菌DH5α,在涂布X-gal+IPTG的LB+Amp平板上筛选
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从pHR11上用HindⅢ酶切下5.9kb的吸氢酶的结构基因和调节基因(hup).载体pIJ2925用HindⅢ酶切后.与上述回收片段酶连,转化大肠杆菌DH5α,在涂布X-gal+IPTG的LB+Amp平板上筛选白斑菌落10个.从质粒pIL01上,用BglⅡ酶切下大小为3.3kb的luxAB基因.载体pIJ2925用BamHI单酶切,去磷酸化后与已回收的luxAB基因酶连.广谱稳定性载体pTR102用BamHI单酶切,经去磷酸化后,回收载体DNA与4.2kb的吸氢酶结构基因相连.将回收的3.3kbluxAB基因与pTR102用BamHI单酶切后的回收片段相连,同样在暗室中挑取目的克隆子.将重组质粒pHN490、pHN500和pHN510分别导入费氏中华根瘤苗HHG30、HW1、HN01、GR3和YC4中,共得到15个转移接合子.在培养条件下的吸氢酶活性的检测结果表明:5个出发菌均没有自生吸氢酶活性,除以HN01和HW1为受体的重组菌以外,以YC4、GR3和HHG30为受体导入pHN500和pHN510的重组根瘤菌均有自生吸氢酶活性.未发现菌株的自生吸氢酶活性与增效性有明显的相关性.
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