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目的:利用抗体基因工程的方法得到高亲和力的抗莪术醇单链抗体蛋白。 方法:利用RT-PCR及分子克隆的技术，从分泌抗莪术醇单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆编码抗体重链及轻链的基因;利用重叠延伸PCR的方法构建抗莪术醇单链抗体基因，并将该基因克隆到大肠杆菌表达载体中;在细菌中诱导表达抗莪术醇单链抗体，并利用ELISA的方法测定抗莪术醇单链抗体与莪术醇的结合能力。 结果:利用RT-PCR的方法获得了抗体轻链及重链Fab片段基因，并克隆在了T载体中，长度为620bp左右;测序后序列分析表明我们获得的抗体基因为全新的抗体基因，在GeneBank中没有报道。利用重叠延伸PCR的方法将轻链和重链基因的可变区通过多聚甘氨酸接头连接为单链抗体，所得单链抗体基因长度为750bp左右。利用PCR克隆的方法将单链抗体基因3末端加入Flag标签序列，并克隆到细菌表达载体pET21a中得到质粒pET21a ScFvFlag 6 XHis(pET21ScFvFH)，测序结果表明基因表达框正确，没有发生突变。将质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，利用IPTG诱导2小时后，Western blot检测到ScFv的表达，大约有95％的ScFv蛋白存在于包涵体，5％的ScFv蛋白为有活力的可溶性蛋白，分子量为34KD。利用ELISA检测到ScFv蛋白高特异性抗莪术醇活力。 结论:此项研究工作利用基因工程的系列方法，从分泌抗莪术醇的杂交瘤细胞株中成功地构建了抗莪术醇单链抗体基因，并且在细菌中表达出了可溶性单链抗体蛋白，所表达的单链抗体具有高特异性抗莪术醇化合物活力。