【摘 要】
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欧洲葡萄(Vitis vinifera)果实内的糖分含量高、口感香甜，是人们酿制葡萄酒的主要原材料之一，具有较高的经济价值。但其抗逆性较差，生长发育过程中易受到病虫害及环境变化等胁迫
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欧洲葡萄(Vitis vinifera)果实内的糖分含量高、口感香甜，是人们酿制葡萄酒的主要原材料之一，具有较高的经济价值。但其抗逆性较差，生长发育过程中易受到病虫害及环境变化等胁迫的侵害，导致其品质和产量受到严重的影响。研究表明，乙烯在植物抵抗逆境胁迫的过程中发挥着重要的作用，而在乙烯的生物合成途径中ACC氧化酶发挥了十分重要的作用，它能直接催化ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)转变为乙烯，因此，研究ACC氧化酶基因表达调控的分子机制具有非常重要的意义。本实验选取欧洲葡萄中ACO1基因的启动子进行克隆和功能分析，从而为葡萄抗逆性研究提供理论依据。利用普通PCR技术，从欧洲葡萄基因组DNA中克隆获得VvACO1基因启动子序列，长度为1956bp，在顺式作用元件分析网站PlantCARE中分析启动子序列中包含的元件，发现该基因启动子序列中包含多种植物逆境胁迫响应元件，如抗氧化胁迫响应元件、热击胁迫响应元件等；还包含多种植物激素响应元件，如脱落酸响应元件、生长素响应元件、赤霉素响应元件及水杨酸响应元件。根据VvACO1基因启动子中顺式作用元件的分析结果，对该启动子序列进行5’缺失片段扩增，获得了4条不同长度的VvACO1基因启动子5’缺失片段（VvACO1P1~VvACO1P4）。将VvACO1基因启动子的4条5’缺失片段分别替换PBI221-LUC表达载体的35S启动子序列，构建了重组的表达载体。利用PEG-Ca2+介导原生质体转化的方法，把重组表达载体转染至拟南芥原生质体中培养，通过检测LUC报告基因的表达水平，发现VvACO1基因启动子P1~P4段均能调控下游LUC报告基因的表达，并且发现VvACO1基因启动子的-1483~-515bp区域有抑制下游基因表达的作用；-515~-88bp区域有促进下游基因表达的作用。综上所述，本实验初步确定了VvACO1基因启动子序列中顺式作用元件的种类、数量及特性，为进一步研究VvACO基因的表达调控机制提供实验数据，为提高葡萄抗逆性的研究提供理论参考。
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