【摘 要】
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肿瘤的演进是一个复杂的多步骤的过程,包括正常细胞的恶性转化、肿瘤的生长、侵袭和转移.肿瘤组织中除了瘤细胞,还包括间质细胞、血管内皮、免疫细胞和细胞外基质(ECM).肿瘤
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肿瘤的演进是一个复杂的多步骤的过程,包括正常细胞的恶性转化、肿瘤的生长、侵袭和转移.肿瘤组织中除了瘤细胞,还包括间质细胞、血管内皮、免疫细胞和细胞外基质(ECM).肿瘤细胞及间质细胞(成纤维细胞/肌成纤维细胞)在与细胞外基质黏附相互作用的过程中,产生并释放大量蛋白水解酶,利于肿瘤细胞进入血液或淋巴循环,并到达特异部位继续生存.这些蛋白水解酶主要有三大类,即金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶.该研究是研究一种能够降解基质并与肿瘤细胞转移密切相关的丝氨酸蛋白酶----成纤维激活蛋白.该研究分三个部分研究了肿瘤转移相关蛋白FAP.首先,为了得到抗FAP的抗体,利用生物工程手段,制备FAP蛋白.我们采用RT-PC R的方法,将从新鲜胃癌组织中获取的总RNA通过逆转录而得到cDNA,将其与pQ E-30质粒载体连接构建表达载体,通过诱导获得完整FAP蛋白,Western blotting验证其为FAP蛋白.为了验证FAP蛋白,制备抗FAP的特异性片段fap-3的多克隆抗体,即抗肽抗体.人工合成含有11个氨基酸的多肽片段fap-3,将其与担体蛋白连接后免疫动物,得到多克隆抗体,经过纯化后,能够与多肽发生特异性反应,免疫组化证实其能够验证肿瘤间质成纤维细胞FAP的表达,用它验证通过生物工程手段获得的FAP蛋白证明有特异性.选择了60例不同分化程度和侵袭程度的胃癌组织,研究FAP在癌间质中的表达.结果显示,FAP在不同组织分型中表达有明显的差异,肠型胃癌表达较低,弥漫型胃癌表达较高;在不同侵袭程度的肿瘤中FAP的表达也有差异,随着侵袭程度的加深,FAP的表达明显增多.同时可见,在发生侵袭的肿瘤细胞周围FAP表达较强,而远离肿瘤细胞的肿瘤间质,FAP表达较弱,这些都说明了FAP与肿瘤的生长和侵袭有着密切的关系,为肿瘤生长提供适宜的微环境,能够成为识别肿瘤侵袭的靶目标,而抑制FAP有可能抑制肿瘤的生长.
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