【摘 要】
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CASTOR编码百脉根(Lotusjaponicus)中的离子通道蛋白，它是共生途径上的功能基因，作用于结瘤因子诱导产生的钙离子激增(calcium spiking)信号转导途径的上游，突变后不能形成根瘤
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CASTOR编码百脉根(Lotusjaponicus)中的离子通道蛋白，它是共生途径上的功能基因，作用于结瘤因子诱导产生的钙离子激增(calcium spiking)信号转导途径的上游，突变后不能形成根瘤。
为了进一步揭示CASTOR调控共生信号途径的分子机制，本文构建了百脉根的cDNA文库，并通过酵母双杂交系统在百脉根的cDNA文库中筛选可能与CASTOR相互作用的蛋白。
以接种根瘤菌(Mesorhizobium loti)后2，4，8，12d的百脉根植株为材料提取总RNA，按照酵母双杂交试剂盒提供的方法构建百脉根的cDNA文库。文库构建后经有限稀释法测定的cDNA文库效率为2×10<6>个转化子/3ug pGADT7-Rec。菌落PCR显示文库的eDNA片段大部分在500bp至2kb之间，文库构建较成功而且无污染。
成功构建了CASTOR-RCK-BD重组质粒，并以其为诱饵筛选百脉根的cDNA3文库。初筛获得111个阳性克隆，经x-Gal检测以及回转酵母验证进一步确认有99个蓝色克隆子，测序以及NCBI BLASTk对分析鉴定JAB1、clpA、钙调素结合的翻译延伸因子等7种可能与CASTOR相互作用的蛋白。其中阳性克隆中钙调素结合的翻译延伸因子的数目最多，占总数的30％以上，而且蛋白的同源性也达到了90％，经DNAMAN等软件分析发现它们可以分为5类。
利用RT-PCR方法检测了这些基因在接种以及不接种根瘤菌的百脉根中的表达水平，结果显示钙调素结合的翻译延伸因子在接种根瘤菌6d的表达量最高，JAB1随着接种天数的增加其表达量也有相应的提高，表明这两种蛋白的表达跟根瘤菌的接种有密切关系。而clpA和泛醌氧化还原酶亚基在接种及不接种根瘤菌的百脉根中，表达量无明显差异。分析推测CASTOR可能与上述蛋白形成复合物参与共生信号的转导。
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