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目的:研究小鼠孤雌活化、体外受精(IVF)与核移植早期胚胎发育过程中,微管蛋白β-tubulin在减数分裂期间的动态变化。
方法:本实验首先研究老化对卵母细胞孤雌激活发育率以及老化对减数分裂期间微管动态变化的影响;并比较IVF胚胎、氯化锶激活的孤雌胚胎和体内受精的原核期胚胎体外发育率的差异;采用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术检测卵母细胞在孤雌激活、IVF、核移植过程中微管及核的动态变化,以分析微管在减数分裂过程中的作用及其对早期胚胎发育的影响。
结果:注射hCG后14h到18h,卵母细胞在体外老化过程中激活率和发育率呈上升趋势,但是差异不显著;短时间的体外老化可以使卵母细胞更容易被激活,且微管发育更完善。体内受精各阶段的发育率显著高于IVF和孤雌激活,而IVF与孤雌激活各阶段发育率差别不显著。孤雌活化过程中,卵母细胞恢复减数分裂,姐妹染色单体分离,被拉向两极,经CB处理后,活化4~6 h,卵周隙中未见Pb<,2>,而在胞质中出现两个混合的单倍体原核,之间由微管相连接。在IVF中,精子进入,激活卵母细胞,减数分裂恢复,纺锤丝牵拉赤道上的母源染色体向纺锤体两侧迁移;末期时,卵母细胞排出Pb<,2>,解聚的雌性染色体形成雌原核,微管分布于Pb<,2>和雌原核之间。同时,精子染色质发生去浓缩与再浓缩,形成雄原核。在原核形成的同时,胞质星体在雌雄原核的周围重组形成长的微管,负责雌、雄原核的迁移靠近。在核移植后的孤雌激活过程中,活化1h,纺锤体组装完成,2h时,移入的成纤维细胞核的同源染色体出现混乱,聚集的染色单体不对称分离,被纺锤体拉向多极,3-5h时,卵周隙中未见Pb<,2>,而在胞质中出现多个类原核,含有清晰的多核仁结构,类原核之间由微管相连。
结论:短时间的体外老化可以使卵母细胞容易被激活,且微管发育更完善。化学活化比IVF容易激活卵母细胞,减数分裂期间微管的发育早且完善。与IVF、孤雌活化的卵相比较,核移植后卵更容易被激活,同源染色体随机分离,但易出现异常,形成多个类原核。