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免疫介导的肝损伤动物模型,是研究免疫细胞及相关基因在肝脏疾病中的功能,以及研究肝病治疗的药物及其作用靶点的重要工具。其中,ConA诱发的小鼠急性肝损伤模型的致病特点与我们人类自身免疫性肝病或病毒性肝炎的病理机制有很多的相似之处,是目前广泛应用的一种重要的免疫介导的肝损伤动物模型。
我们在研究中发现,用实时定量PCR分析ConA引起肝炎模型中(CIH),目标基因在疾病进程中表达的变化时,最常用的两个内参基因ACTB与GAPDH均不是合适内参基因。进一步分析发现,在CIH模型中,RPLP0及HPRT1是比较合适的内参基因。
进而,我们以CIH模型为工具,研究了中药单体穿心莲内酯对肝损伤的保护作用。实验发现,穿心莲内酯能够抑制ConA引起的血清中ALT水平的升高,减少血清中TNF-α的释放,抑制了肝脏的坏死及肝细胞的凋亡；同时,穿心莲内酯能够抑制肝脏中IL-1、IL-6炎症因子mRNA水平的表达。进一步实验证实,ConA引起肝损伤过程中,氧化应激所诱导的基因,如Glutl、iNOS、COX2、HIF-1α、HMOX1等mRNA水平均有显著高表达,而穿心莲内酯处理的小鼠中,上述氧化应激所诱导的基因mRNA表达水平均显著降低。研究中还发现,ConA处理抑制了肝脏中SOD1 mRNA水平的表达,而穿心莲能够显著增加ConA处理后SOD1的表达,提示SOD1可能在穿心莲内酯保护肝损伤过程中发挥一定作用。通过上述结果,我们推测穿心莲内酯可能通过抑制了氧化应激进而起保护作用。为了验证这一假设,我们通过ROS清除剂NAC处理小鼠后,发现穿心莲内酯对血清中TNF-α的抑制作用与单用NAC组相同,这一结果与我们的假设相符。
综上所述,我们的研究发现,RPLP0和HPRT1是ConA诱导肝损伤模型中Q-PCR定量分析合适的内参基因。进而利用这一模型,我们发现穿心莲内酯能够明显保护肝损伤,而这种保护作用可能是通过清除肝损伤过程中产生的过量ROS而实现的。