论文部分内容阅读
本论文主要由3个相对独立的部分组成：中国恒河猴单核细胞来源的树突状细胞的表型及功能研究；外周血DC亚群在SIVmac239感染的中国恒河猴中数量及细胞因子的变化以及急性感染期SIVmac239对中国恒河猴外周血DC亚群的凋亡和免疫表型的影响。
非人灵长类动物是人类的近亲，由于在组织结构、免疫、生理和代谢等诸多方面与人类高度近似，科学界较普遍地利用非人灵长类作为动物模型来进行艾滋病(AIDS)的发病机制和疫苗研究。中国恒河猴发病缓慢，更适合于HIV感染的相关研究。在本研究中，我们在体外成功培养了中国恒河猴单核细胞来源的树突状细胞(monocyte derived dendritic cells，MDDC)，并测定其表型和免疫刺激功能。通过GM-CSF和IL-4共同刺激培养单核细胞6天以后便获得了未成熟MDDC，随后加入几TL-1β、PGE2、LPS和TNF-α联合刺激MDDC成熟。成熟的MDDC上调了共刺激分子和CD83的表达，具有很强的刺激T淋巴细胞增殖的能力并分泌大量的TL-12。本研究为后续的DC疫苗研究奠定了基础。
我们实验室建立了SIVmac239感染的中国恒河猴动物模型。以该模型为依托，我们研究了外周血中DC亚群在急性感染期以及慢性感染期的数量、表型及功能变化。DC作为最重要的连接先天免疫与获得性免疫的抗原递呈细胞，在AIDS发病进程中扮演着重要的角色。研究发现AIDS患者血液和淋巴结中髓样DC(myeloid DC，mDC)和浆细胞样DC(plasmacytoid DC，pDC)会随着感染的进程而减少，并且伴随着功能损伤。本论文通过研究发现，中国恒河猴的DC亚群数量在感染后尽管波动十分剧烈，但并没有显著性地增加或减少，在后期DC数量能够回升到正常的范围之类，这种回升不同于印度恒河猴，很可能是中国恒河猴缓慢发病的因为之一。进一步通过研究体外刺激DC亚群分泌的细胞因子，我们发现在急性感染期，pDC分泌的IFN-α显著提高，并很可能刺激mDC成熟并促进了IL-12的分泌。早期大量细胞因子的分泌有助于控制病毒复制，但同时也激起了整个免疫系统的活化，促进了疾病进程。而在整个感染阶段，IFN-α与CD4+T细胞呈正相关，而与病毒载量呈负相关，表明了IFN-α对于延缓疾病进程具有重要的意义。
我们测定了急性感染期DC亚群受病毒影响而发生的表型变化，发现pDC更容易受到病毒影响而发生凋亡，这可能与pDC高表达SIV受体CD4和CCR5有关。在感染过程中，尽管mDC和pDC都显著地下调了CD4表达，而上调了CCR5的表达，不过仅发现pDC CD4的表达与病毒载量呈负相关，而CCR5的表达与病毒载量呈正相关。在此过程中DC亚群都会因为病毒的影响而活化，继而提高CCR7的表达。同时无论mDC还是pDC，其表达的CD80和CD86都与病毒载量呈正相关。在早期感染中，DC的活化促使整个免疫系统针对病毒发挥免疫反应，对于控制疾病发展具有重要意义。