基于动态DNA纳米自组装的核酸荧光检测新方法研究

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随着疾病的复杂化、多样化,人们对检测方法的要求越来越高。特别是对疾病相关核酸分子标志物的精准检测,在预示疾病的发生、发展和预后中具有重要价值。目前,常规的核酸检测方法主要包括PCR,微阵列,Northern blot等,但这些方法均有一些缺陷,比如,操作复杂、耗时、假阳性高等。因此,发展高灵敏、稳定、简单的核酸检测新方法对临床诊断和生物分析具有重要意义。近年来,由于杂交链反应(HCR)具有温和的反应条件、简单的序列设计、无蛋白酶参与等特性,受到了研究者的广泛青睐,并发展了多种生物传感方法。但是,单独的HCR反应检测灵敏度有限,不能满足低丰度靶物质的分析需要。基于此,本研究设计了一种无酶等温的双重放大策略-杂交链反应驱使的熵驱动循环反应(HCR-EDCR),用于快速灵敏的核酸检测。靶DNA特异性的与识别序列结合,引起上游的HCR反应,发夹H1和H2持续交替组装成含有引物链的双链DNA纳米线;DNA纳米线上的引物链驱使下游的EDCR,持续的释放报告链,产生大量的荧光信号,根据荧光信号的强弱对靶物质的浓度进行定量。此方法在无需蛋白酶的情况下实现了对靶DNA高灵敏和高特异性检测,其最低检测限为87 fM;并且该方法整个反应过程只需45分钟,极大的提高了分析效率;此外,仅仅替换识别靶物质的序列,该策略能够实现蛋白质、细胞、小分子等多种生物分子的检测。因此,该双重放大策略有望为临床分子诊断和生物医学分析提供有力的技术支持。
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