声敏型脂质纳米粒联合低功率聚焦超声对HepG2细胞增殖的影响及其体外CT成像的实验研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenan110
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第一部分 声敏型脂质纳米粒的制备及性能检测
  目的:制备一种载血卟啉单甲醚( hematoporphyrin monomethyl ether, HMME)包裹全氟溴辛烷(1-Bromoheptadecafluorooctane, PFOB)及阿霉素(Doxorubicin, DOX)的声敏型脂质纳米粒。检测其一般理化特性,HMME和DOX的包封率以及体外释放药物的能力。
  方法:采用薄膜水化法制备载HMME包裹PFOB及DOX的声敏型脂质纳米粒(soundsensitive nano-liposomes SNL)。检测其粒径、电位以及光吸收特性等理化性质;采用高效液相色谱法分别绘制HMME和DOX的标准曲线,计算出SNL中HMME和DOX各自的包封率;采用高效液相色谱法检测体外SNL在低功率聚焦超声(low intensity focus ultrosound,LIFU)作用下释放HMME和DOX的情况。
  结果:所制备的SNL,粒径为(282.53±6.95)nm,电位为(-45.46 ±1.22)mV;透射电镜下观察,SNL成球形,电子不易穿过呈深黑色,给予LIFU作用后,电子较易穿过呈半透明;根据绘制的标准曲线,计算出HMME的包封率为(80.15±15.11)%、DOX的包封率为(46.47±4.82)%;经0.2w/cm2的LIFU处理,8h内SNL释放HMME达(45.54±3.48)%,DOX达(83.45±2.97)%,经0.4w/cm2的LIFU处理,8h内SNL释放HMME达(47.37±5.60)%,DOX达(79.42 ±4.36)%。
  结论:成功制备出载HMME包裹PFOB及DOX的声敏型脂质纳米粒(SNL),其形态为球形,粒径大小均一,分布均匀,HMME及DOX的包封率较高,经LIFU处理,可有效地增强药物释放,并且在LIFU的强度提高时,释放药物的能力也有所加强。
  第二部分 声敏型脂质纳米粒与LIFU作用产生声动力效果研究
  目的:探究声敏型脂质纳米粒在LIFU作用下产生声动力的效果。
  方法:以 DPBF(1,3-二苯基异苯并呋喃)为活性氧探针,采用荧光分光光度计检测不同HMME浓度的SNL与LIFU,以及SNL与不同强度的LIFU作用后剩余DPBF产生的荧光,与对照组比较间接反映产生活性氧的相对量。以DCFH-DA(2,7-二氯荧光黄双乙酸盐)为活性氧探针,采用激光共聚焦显微镜观察HepG2细胞在与SNL共孵育后,LIFU处理下产生的绿色荧光,间接反映产生活性氧的相对量,同时采用流式细胞技术仪检测产生的绿色荧光的强度。
  结果:以DPBF为活性氧探针,产生活性氧的相对量随SNL中HMME浓度的增加或LIFU强度增高而增多;SNL与HepG2细胞后,以DCFH-DA为活性氧探针,激光共聚焦观察显示 SNL+LIFU(0.2W/cm2)组较 SNL组绿色荧光强,当LIFU为0.4W/cm2时,绿色荧光更强。
  结论:SNL产生活性氧的能力跟声敏剂HMME的浓度呈正相关,同时,随着LIFU强度的提高而增多;当SNL与HepG2细胞共孵育后,产生活性氧的能力也与声敏剂HMME的浓度呈正相关,LIFU强度增加产生的活性氧也增加。
  第三部分 声敏型脂质纳纳米粒CT成像及体外治疗的研究
  目的:检测声敏型脂质纳米粒体外CT显像能力,评价其细胞毒性及声动力联合化疗的治疗效果。
  方法:采用CT仪观察不同PFOB浓度((386,193,96.5,48.25, 24.125,12.0625)mg/mL)的SNL的CT成像效果;采用CCK8法检测SNL 的细胞毒性,将不同分组的脂质纳米粒与 HepG2 细胞共孵育,6h后 LIFU 组、HNL+LIFU 组和 SNL+LIFU 组分别予以 LIFU(0.4W/cm2, 680kHz,脉冲2s,1min)处理,各组均与SNL共孵育24h,以单纯LIFU组为对照组,CCK8实验检测各组的细胞毒性,并计算IC50。
  结果:CT仪能观察到SNL具有明显的CT成像效果,且CT值与SNL中 PFOB 的浓度呈正相关(P<0.05);CCK8 实验结果显示磷脂浓度在0.52083~200μg/mL之间,HepG2细胞的存活率均高于85%,差异无统计学意义( F=0.719 , P>0.05 );LIFU 组 HepG2 细胞的存活率为(92.85±2.36)%;DNL组的细胞存活率DOX组的高(P<0.05);HNL+LIFU组的细胞存活率较 HNL 组低(P<0.05);SNL+LIFU 组的细胞存活率较HNL+LIFU组、DNL组和DOX组均低(P<0.05)。
  结论:制备的声敏型脂质纳米粒具有良好的生物安全性,具备 CT成像的能力及联合声动力治疗和化疗增强对 HepG2 细胞的杀伤作用,为体内实验奠定了基础。
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