转基因植株的筛选、T-DNA定位及转CYCB1;2拟南芥的表型观察

• 作 者: 刘海珠
• 机 构: 南京大学
• 出 处: 南京大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 转基因拟南芥 植株筛选 周期蛋白基因 T-DNA定位 生长发育 表型观察

本硕士论文主要包括两个部分。第一部分为对转基因拟南芥的筛选、鉴定和T-DNA定位；第二部分是对周期蛋白基因CYCB1；2的过量表达所引起的拟南芥形态和生长发育状况的观察。　　
在第一部分，我们通过抗性筛选和PCR鉴定的方法得到了纯合的转化植株，并且采用了两种基于PCR的方法对转基因拟南芥进行T-DNA定位。这两种方法的主要区别在于获得接头的方法的不同。第一种方法是直接采用的Cottage等人所发表的方法，在这一方法中，接头的获得是通过化学合成两条单链(一条长链和一条短链)，通过人工退火来生成合适的接头；而在第二种方法中，我们改进了Zhou等人的方法，原方法通过单酶切质粒来生成接头的方法，而在我们的实验中，接头是直接以菌液作为底物，由PCR的方法来扩增出菌体中的质粒的一段特异性序列作为前体接头，前体接头经由特异的酶切割生成我们所需要的接头。　　
在转基因拟南芥的表型观察这一部分，我们观察了植株的根的长度、侧根的生长情况、根毛的发生、根的向重力性弯曲的情况以及植株的整个发育过程的变化，包括抽苔、开花、结果的时间以及真叶的数目变化和角果的长度变化。通过雌激素诱导CYCB1；2的表达，我们观察到，CYCB1；2蛋白的过量表达，会引起植株根长的缩短、侧根数目的减少、向重力性弯曲程度的减弱，另外我们还发现在CYCB1；2过量表达的植株中，根毛的数目具有减少的趋势。不过这些由CYCB1；2的过量表达所引起的植株的根的形态和生长状态的变化，并不十分明显可见，这可能是由于在根的生长发展过程中，CYCB1；2并不是起关键作用的分裂期周期蛋白。而对植株生长发育过程的观察，并没有发现CYCB1；2的过量表达对植株会产生影响，一方面可能是由于诱导方法存在的问题，但也可能是CYCB1；2蛋白对我们所观察到的植株生长发育的各项指标不具有明显的影响。另外我们还发现，雌激素对植株根的正常生长具有抑制作用。