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氢酶是微生物氢代谢过程中的关键酶，它催化分子氢的氧化与质子还原(H2←→2H++2e-).对氢酶的研究不仅可以揭示微生物的生理代谢规律，而且对探索和利用微生物制取燃料氢有重要意义.产酸克雷伯氏菌HP1(KlebsiellaoxytocaHP1)是一株放氢活性较高的菌株，其培养条件简单粗放，培养周期短，可以大规模发酵培养，菌体产量高.本研究对K.oxytocaHP1的可溶性氢酶进行分离提纯，并分析了影响可溶性氢酶放氢活性的条件，为进一步研究该氢酶的结构与催化机理奠定了良好的基础.
取菌泥20g悬浮于Tris-HCl缓冲液(30mmol/L，pH8.0)中.菌悬液经超声波处理(400W，破碎35s/次，间歇15s/次，共60次)，高速离心(8,000×g，15min)和超速离心(100,000×g，30min)后得到氢酶的粗提液.粗提液经过20％硫酸铵和60％硫酸铵分部沉淀后，酶被提纯了1.93倍.初步纯化酶液经过SephadexG-25脱盐并超滤浓缩后，过DEAE-SepharoseF.F.柱，采用连续梯度洗脱(0～0.4mol/LNaCl).收集含可溶性氢酶的洗脱液，经过浓缩后，过SephacrylS-200柱.收集含可溶性氢酶活性的组份，再经过浓缩脱盐后，过TSK-DEAE柱，采用分部洗脱，用含有0.3mol/LNaCl的Tris-HCl缓冲液(pH8.0)沈脱氢酶.经过3次柱层析分离纯化后，氢酶被纯化约200倍，得率为15.3％，氢酶的放氢活性为17.68μmolH2/min·mgprot.
K.oxytocaHP1可溶性氢酶催化放氢的最适温度为30℃，当温度超过65℃时，氢酶很快失活.氢酶催化的最适pH值为7.5，在pH5.0～7.5范围内，氢酶的活性随着pH值的升高而增加，在pH7.5～10.0范围内，氢酶的活性随着pH值的增加而降低.氧对氢酶活性有较大的影响，在用纯氧饱和的缓冲液中，氢酶催化活性在3h内失活50％以上.不同电子载体对氢酶的放氢活性有较大影响，甲基紫晶(MV)是氢酶催化放氢的最适人工电子载体.