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一、研究背景 血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)是一种间充质细胞，主要分布在血管中膜。在正常情况下，血管平滑肌细胞处于增殖不活跃的静止期，主要发挥收缩功能以维持血管壁的张力;然而在一些诸如动脉粥样硬化及血管损伤等病理情况下，VSMCs则在一些生长因子的调节下发挥以增殖为主的功能，从而影响血管正常的功能和构型。因此，VSMCs的异常增殖是引起动脉粥样硬化、损伤后血管再狭窄及血管重塑等血管增生性疾病的重要发病机制。 VSMCs的异常增殖是多种生长因子共同调控的，而其中血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)发挥了及其重要的作用。PDGF主要是从VSMCs、激活的巨噬细胞以及内皮细胞中合成和产生的，在VSMCs的增殖的过程中扮演了重要的角色。PDGF家族有五种亚型，包括PDGF-AA、-BB、-AB、-CC、-DD，而其中PDGF-BB对刺激血管平滑肌细胞的增殖起到尤其重要的作用。PDGF-BB通过与其受体PDGFR结合，导致PDGFR多个酪氨酸位点磷酸化，从而激活3条主要的信号传导通路:促分裂素原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases/extracellularregulated protein kinases，MAPK/ERK)，磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylino sitol3-kinase，PI3K)以及磷脂酶C-γ（PLC-γ）等通路。激活的PDGF信号通路可以引起诸如高血压、动脉粥样硬化、血管再狭窄等心血管的疾病的发生发展。因此调节VSMCs的PDGF信号通路可能是治疗血管再狭窄及动脉粥样硬化等疾病的重要途径。 以往研究证实，过度激活的肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)可能导致PDGF-BB的升高以及其受体的激活，从而引起和加重损伤后新生内膜过度增生。而RAAS的阻断剂血管紧张素转化酶抑制剂及血管紧张素II受体阻滞剂均对PDGF-BB及其信号通路有一定的抑制作用。阿利吉仑是一种新特异的RAAS阻断剂，它能抑制肾素的活性，从而在源头上阻断RAAS的激活。阿利吉仑不仅有着强大的血压控制能力，而且在预防动脉粥样硬化、治疗心衰和保护肾脏都有着重要作用。然而，阿利吉仑是否具有抑制抑制PDGF-BB介导的VSMCs的过度增殖作用并不清楚。我们推测:阿利吉仑可以调节VSMCs中PDGF-BB的信号通路的激活及细胞周期蛋白的表达，从而抑制PDGF-BB介导的VSMCs的过度增殖作用。因此，本研究利用胚胎大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10)细胞为研究对象，通过不同浓度阿利吉仑和PDGF-BB共同孵育VSMCs的情况下，观察A10细胞增殖的改变，以了解阿利吉仑对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖的抑制作用，并且探讨这种抑制作用的可能机制。 二、研究目的 主要从细胞水平明确阿利吉仑对PDGF-BB诱导的血管平滑肌增殖的影响，以及其影响的机制。 三、研究方法 1.培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A10细胞); 2.采用[3H]-TdR和细胞计数，评估细胞的增殖情况; 3.用免疫印迹的方法检测阿利吉仑对PDGF-BB信号通路的影响; 4.采用流式细胞术分析阿利吉仑对PDGF-BB诱导的细胞周期改变的影响，并用免疫印迹的方法检测周期蛋白表达量的改变。 四、研究结果 1.PDGF-BB可以明显促进A10增殖，且呈浓度依赖性;阿利吉仑可以轻度抑制A10细胞增殖，且可以明显抑制PDGF-BB诱导的A10细胞增殖。 2.PDGF-BB刺激A10细胞引起下游ERK、AKT等信号通路的激活，而阿利吉仑可以显著抑制ERK通路的激活。 3.PDGF-BB可以诱导的细胞周期的改变使处于G0/G1期的细胞比例显著降低，S期和G2/M期细胞比例明显增加;而阿利吉仑可以抑制这种改变，使细胞周期停滞于G0/G1期。 PDGF-BB诱导细胞周期蛋白（CDK2、CDK4、cyclin E和cyclin D1）表达量升高，而阿利吉仑可以抑制CDK2、CDK4和cyclin D1的升高。 五、结论 PDGF-BB刺激A10细胞可以引起其过度的增殖，这种作用可以被阿利吉仑所抑制。提示肾素抑制剂阿利吉仑有望成为血管增殖性疾病的新靶点。