山银花中皂苷含量测定及指纹图谱研究

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目的:山银花是我国一种常见的中药材,具有清热解毒、凉散风热的功效,临床应用颇为广泛。回顾过往研究,对于山银花的质量评价,大多通过测定其中的绿原酸这一指标成分的含量来对其质量进行控制和评价,这并不能全面反映其质量。常春藤皂苷类成分也是山银花中的重要成分,其含量也应和绿原酸一起作为质量控制的一部分。中药指纹图谱中峰的数量和高低能够表征中药材中所含成分种类与其各自的相对含量,进而整体、系统地反映和评价中药材的内在质量。因此,对常春藤皂苷类成分含量测定方法的研究及建立山银花的指纹图谱对于山银花质量全面控制和科学评价具有重要意义。因此,本文研究目的如下:建立酸水解后直接测定及衍生化后测定山银花中常春藤皂苷元的方法,并比较两种方法的优劣;建立山银花药材的HPLC指纹图谱,并得到对照图谱,再对所收集的山银花药材的指纹图谱特征进行比较。方法:1、常春藤皂苷元含量测定方法研究:(1)酸水解后直接测定法:以盐酸-乙醇溶液为水解溶剂,加热回流4h,再用三氯甲烷萃取;采用HPLC法,以Waters Symmetry(?) C18(150x4.6mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.4%冰醋酸水溶液(80:20)为流动相,流速为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波长为210nm,测定常春藤皂苷元含量。(2)酸水解后衍生化测定法:在上述酸水解的基础上,以吡啶-苯甲酰氯为衍生化试剂,对常春藤皂苷元进行柱前衍生化,采用HPLC法测定。以Waters Symmetry(?) C18(150x4.6mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.2%磷酸水溶液(90:10)为流动相,流速为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波长为230nm,以衍生化法测定常春藤皂苷元的含量。2、指纹图谱的建立:采用RP-HPLC方法,色谱柱:Waters Symmetry(?) C18(150×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长:240nm;流速:1.0mL/min;柱温:25℃;进样量:10μL。采用国家药典委员会开发的中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.1版本)软件,分别对10批不同产地及湖南隆回所产的11批山银花药材的HPLC指纹图谱进行相似度评价,并建立对照指纹图谱。结果:1、建立了酸水解后HPLC直接测定和酸水解后柱前衍生化HPLC测定山银花药材中的常春藤皂苷元的含量,两种方法测定结果相近,其中采用柱前衍生化法所测定的结果稍高。2、建立了山银花药材的指纹图谱,并对10批不同产地及湖南隆回所产的11批山银花药材进行了相似度评价,10批不同产地的山银花药材相似度在0.957以上,湖南隆回所产的11批山银花药材相似度在0.969以上。结论:采用酸水解后HPLC直接测定和酸水解后柱前衍生化HPLC测定了各样品中的常春藤皂苷元的含量,所建立的两种皂苷元含量测定方法精密度及重现性良好,结果准确,可用于对山银花中常春藤皂苷的质量控制;本研究所建立的山银花药材的指纹图谱非常稳定,重现性好,分离度较高,可用于对山银花药材进行全面的质量评价及控制。
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