酒制女贞子治疗骨质疏松的物质基础和作用机制研究

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目的:建立酸水解法提高女贞子提取物中红景天苷含量的方法;进行女贞子炮制前后浸膏的抗骨质疏松作用的对比研究,为酒制女贞子的抗骨质疏松作用在临床上的应用提供理论基础。  方法:以红景天苷和酪醇的含量为考察指标,考察料液比、水解时间和水解温度对红景天苷含量的影响,用HPLC测定含量,采用正交实验法优选女贞子提取物中红景天苷的水解工艺条件,同时优选提取纯化工艺条件。采用HPLC法同时测定女贞子炮制前后浸膏中有效成分红景天苷、羟基酪醇和特女贞苷三者的含量;然后采用 ALP活性来考察其对UMR-106细胞的分化作用的影响;采用脂质体瞬时转染的方法,利用转染雌激素受体ERα/β(estrogen receptorα/β)表达质粒的HeLa细胞,观察女贞子酒制前后浸膏对雌激素反应元件ERE(estrogen response element)报告基因的转录激活作用,考察植物拟雌激素样作用;同时选用DPPH、FRAP和ABTS三种抗氧化方法考察其总抗氧化能力大小。  结果:女贞子最佳回流提取工艺条件为:6倍量水回流提取3次,每次1h。冰乙酸与女贞子提取液的料液比和水解时间对红景天苷的含量起主要作用,最佳冰乙酸水解条件为:在女贞子浓缩液中加入体积比为20︰1的冰乙酸,100℃下回流20h。水解后红景天苷的含量约为未经酸水解的3倍。D4020型大孔树脂纯化女贞子中红景天苷的工艺条件为:上样浓度为0.5 g浸膏?mL-1,料液与大孔树脂体积比为1:30,吸附流速为1 BV?h-1,用20%乙醇洗脱5倍树脂体积。女贞子中有效成分红景天苷、羟基酪醇和特女贞苷三者的含量酒制后均高于生品;炮制前后均能不同程度地诱导ERE报告基因的转录激活;均能促进UMR-106细胞中ALP活性增强,且酒制品优于生品;酒制后总抗氧化能力高于生品。  结论:通过优化提取纯化工艺,采用冰乙酸水解法可显著提高女贞子提取物中红景天苷的含量。女贞子酒制后具有抗骨质疏松作用且优于生品。
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