【摘 要】
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该文利用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用的方法,对灌服黄连解毒汤的大鼠的含药血清进行入血成分分析,并制备了大量的供试品,在细胞水平上研究样品对肿瘤细胞产生的炎症性细
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该文利用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用的方法,对灌服黄连解毒汤的大鼠的含药血清进行入血成分分析,并制备了大量的供试品,在细胞水平上研究样品对肿瘤细胞产生的炎症性细胞因子的影响,从而确定该中药复方吸收入血的有效成分.在黄连解毒汤入血成分研究中,采用给大鼠灌服黄连解毒汤的水煎液,在给药后选定的时间点腹主动脉取血,处理所得血清,在液质联用仪上进行分析,结果表明,给药后两小时黄连解毒汤中大多数成分达到最大吸收浓度;没有检测到黄连、黄柏中的生物碱.并在血清中发现一个可能是栀子代谢产生的物质:之后的实验中,在两小时的时间点上收集了二百只大鼠的含药血清,将其分离并制备成大量的供试品,以供之后的生物活性实验所用.在生物活性筛选实验中,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)考查了分离制备的的含药大鼠血清共十部分供试品样品对重要的炎症相关细胞因子TNF α、IL-1 β的影响.结果表明:含有栀子苷、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素的样品,在刺激剂浓度(LPS 10 μ g/ml+PMA 200 nmol/L)适中,即细胞因子的产生量最高(类似于机体受到细菌感染后遭到细菌分泌的大量内毒素攻击产生炎症时巨噬细胞等免疫细胞产生大量炎症相关细胞因子的情况),上述样品能显著抑制TNF α和IL-1β的产生.最后的实验中,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,考察了汉黄芩素对TNFαmRNA表达的影n.结果表明汉黄芩素对THP-1细胞分泌TNFα的影响是通过对mRNA表达水平的调节完成的.
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