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该课题旨在探索以下几个问题:1、雄激素对大鼠阴茎勃起功能、海绵体组织内皮细胞和平滑肌细胞有何影响?2、雄激素对大鼠阴茎组织NOS活性以及三型NOS同工酶的表达有无影响?3、雄激素对大鼠阴茎组织VEGF及其受体的表达有何影响?4、雄激素对大鼠MPOA NOS阳性神经元有无影响?第一部分 雄激素对大鼠阴茎组织结构和勃起功能的影响;为进一步探讨和证实雄激素对阴茎组织结构和勃起功能的影响,将40只2个月龄雄性SD大鼠分成4组,分别予以手术切除双侧睾丸(去势组),假手术(假手术组),手术去势后予以丙酸睾丸酮5mg/kg体重,2天一次肌内注射(去势+睾酮替代组),以及假手术后喂饲5α还原酶抑制剂保列治4.5mg/kg体重,每天一次(保列治组).将24只2个月龄雌性大鼠手术切除双侧卵巢,在交配试验前3天开始肌肉注射雌二醇苯甲酸酯5.0mg/kg体重,每天一次,在交配试验前4小时肌肉注射甲基孕酮2.5mg/kg体重诱导发情,分别将处理后2周和2个月的雄性大鼠与达到发情期的雌性大鼠合笼,观察交配情况并记录30分钟内阴茎插入阴道的次数.交配试验后将大鼠麻醉,分离海绵体神经,微型压力传感器测量电刺激后海绵体内压.应用内皮细胞特异性标志物CD-31分子和平滑肌特异性标志物α-actin对处理后2周的大鼠阴茎海绵体组织行免疫组织化学染色,了解雄激素对大鼠阴茎组织血管内皮细胞和平滑肌细胞的影响.第二部分 雄激素对大鼠阴茎组织一氧化氮合酶(NOS)表达与活性的影响;2个月龄雄性SD大鼠按照第一部分的方法分成去势组、假手术组、去势+睾酮替代组以及保列治组.分别于处理后2周和2个月取阴茎叶段组织,一部分新鲜组织剪碎,匀浆,离心,取上清液用硝酸还原酶法及Griess试剂进行NOS活性测定.另一部分新鲜组织在组织细胞裂解液中提取蛋白、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后行三种NOS同工酶Western杂交,分析其蛋白表达水平.第三部分 雄激素对大鼠阴茎组织VEGF及其受体表达的影响;阴茎海绵体是一个富含血管内皮细胞和窦内皮细胞的器官,第一部分的实验结果已经证实,雄激素对阴茎勃起功能以及内皮细胞和平滑肌细胞都有影响.而血管内皮生长因子(VEGF)是内皮细胞特异性的有丝分裂因子,可诱导内皮细胞分裂与移行.为了进一步探讨雄激素对阴茎海绵体内皮细胞的调节是否也与血管内皮生长因子有关,将40只2个月龄SD雄性大鼠按照第一部分的方法随机分成假手术组,手术去势组,去势+睾酮替代组,以及保列治组.于处理后2周后处死大鼠,一部分取阴茎新鲜中段组织,在组织细胞裂解液中提取蛋白、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后行VEGF及其受体Flk-1/KDR Western杂交,分析其蛋白表达水平.另一部分大鼠以4％多聚甲醛磷酸缓冲液行心脏灌注固定.分离阴茎海绵体,取阴茎中段组织,4％多聚甲醛后固定4小时,将组织经酒精梯度脱水,二甲苯透明、石蜡包埋、切片后一部分行VEGF及其受体Flk-1/KDR免疫组织化学染色.另一部分行VEGF mRNA原位杂交.并运用计算机图象分析系统,比较其表达强度.第四部分 雄激素对大鼠下丘脑一氧化氮合酶阳性神经元的影响;为探讨雄激素地大鼠性反应调节中枢一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的影响,将40只2个月龄雄性SD大鼠按照第一部分的方法随机分成去势组,假手术组,去势+睾酮替代组,以及保列治组.分别于处理后2周和2个月用4％多聚甲醛磷酸缓冲液心脏灌注固定.在脑立体定位仪上采用平颅头位取前囟向尾侧2mm一段脑,4％多聚甲醛后固定4h,用7.5％,15％,30％的冷蔗糖磷酸缓冲液梯度脱水,OCT包埋,-70℃冷丙酮固定,作连续冠状冰冻切片,片厚20μm,对下丘脑视前内侧区(MPOA)、视上核(SON)、室旁核(PVN)、内侧杏仁核(MeA)以及终纹床核(BNST)行尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)组织化学染色.应用彩色病理图文管理系统,对各脑区NOS阳性神经元染色结果进行图像分析,测量NOS阳性神经元阳性颗粒的面积和平均灰度值.结论:1、大鼠阴茎勃起功能对雄激素具有依赖性;2、大鼠阴茎海绵体组织内皮细胞和平滑肌细胞受不同雄激素状态的影响;3、雄激素对大鼠阴茎海绵体组织NOS活性以及结构型NOS的表达均有正向调节作用,阴茎海绵体组织iNOS的表达不受雄激素水平的调节.NOS活性对雄激素的变化比蛋白表达更敏感;4、雄激素对大鼠阴茎海绵体组织中VEGF以及VEGF mRNA的表达均有上调作用,而对VEGF受体Flk-1/KDR的表达无影响;5、大鼠下丘脑NOS阳性神经元与不同雄激素状态有关;6、调节大鼠阴茎勃起功能的主要激素活性成分可能为5α-双氢睾酮.