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目的：利用原核表达系统制备人rBPI23蛋白，免疫家兔获得多克隆抗体，免疫小鼠制备单克隆抗体，为后期建立BPI免疫学检测方法并开发研制试剂盒奠定基础。
方法：
(1)将本室构建的PBV220-synBPI600表达质粒转化感受态E.coli DH5α，温控诱导后，获得以包涵体形式表达的目的重组蛋白，用SDS-PAGE鉴定其分子量，Western-blot鉴定其抗原性。
(2)将上述重组蛋白溶解在8mol/L尿素变性溶解剂中，与等量佐剂混合，用匀浆器乳化成“油包水”状态，免疫家兔制备多克隆抗体。初次免疫用弗氏完全佐剂乳化抗原总量250μg背部皮下分10点注射，以后每隔两周加强免疫一次；加强免疫使用弗氏不完全佐剂乳化抗原，注射部位及剂量同上。第二次加强免疫后7天家兔耳缘静脉取血，用ELISA和Western-blot鉴定血清中的抗体，效价达到1∶105以上后，再加强免疫一次，七天后颈动脉放血分离血清，获得抗rBPI23蛋白的抗血清；用间接ELISA法检测抗体效价，Western-blot分析抗体的特异性，用饱和硫酸铵沉淀法和蛋白A层析柱法纯化抗体。
(3)以上述同样的抗原免疫6～8周龄Balb/c小鼠，利用小鼠淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。初次免疫用弗氏完全佐剂乳化抗原50μg腹部皮下及足垫分6～8点注射，加强免疫用弗氏不完全佐剂乳化抗原50μg腹腔注射。第二次加强免疫后7天小鼠眼眶静脉丛采血，用ELISA和Western-blot鉴定小鼠血清中的抗体，效价达到1∶105以上后，用rBPI23蛋白50μg尾静脉冲击免疫，72h后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG4000的作用下融合，通过HAT培养基选择获得融合成功的杂交瘤细胞。采用ELISA和Western-blot等方法筛选分泌抗体的阳性细胞克隆，利用有限稀释法将阳性细胞克隆进行三次亚克隆，获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株；将其培养至对数生长期，腹腔注射Balb/c小鼠(4×106个细胞/只)，两周左右待小鼠腹部膨大濒临死亡时，处死小鼠收集腹水。采用间接ELISA法检测腹水中抗体效价，Western-blot分析抗体特异性，夹心ELISA法鉴定抗体的类及亚类，用秋水仙素阻抑法检查杂交瘤细胞的染色体，用饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水中的IgM抗体，用蛋白A层析柱法纯化IgG抗体，SDS-PAGE电泳对纯化后抗体进行鉴定。
结果：
(1)rBPI23蛋白主要以包涵体形式表达，SDS-PAGE显示其分子量约23kD，与预期结果相符；Western-blot结果显示该重组蛋白能与市售兔抗人BPI抗体特异性结合，表明该重组蛋白与BPI具有某些相同的抗原表位。
(2)以rBPI23蛋白为抗原免疫家兔获得高效价(1∶320000)抗血清，Western-blot证实上述抗体能与rBPI23蛋白及人BPI标准品特异性结合，表明本实验制备的抗血清能与BPI N端相应抗原表位特异性结合，可用来对BPI23-Fcγ1重组蛋白和BPI N端功能片段进行检测鉴定，也为制备高亲和性BPI单克隆抗体奠定了基础。
(3)采用小鼠淋巴细胞杂交瘤技术共筛选出5个能够分泌rBPI23特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1A2、1A7、1B2、9E11、11A11；经染色体检查证实上述杂交瘤细胞确为脾细胞和骨髓瘤细胞的融合体。Balb/c小鼠腹腔注射对数生长期杂交瘤细胞两周后，收集腹水获得的单克隆抗体效价分别为1∶64000、1∶16000、1∶32000、1∶10000、1∶10000；其中1A2和11A11单克隆抗体属于IgM，1B2单克隆抗体属于IgG2b，1A7和9E11单克隆抗体属于IgG1，上述单克隆抗体既能识别rBPI23蛋白，也能识别人BPI标准品。
结论：成功制备了人rBPI23蛋白；免疫家兔获得高效价rBPI23特异性多克隆抗体；通过融合方法获得5个能够分泌rBPI23特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，腹腔接种后从腹水中收获的单克隆抗体能特异性识别rBPI23和人BPI标准品，为后期建立BPI免疫学检测方法、开发研制BPI检测试剂盒奠定基础。