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本研究以优良的水稻恢复系蜀恢818(R818)为受体材料,采用农杆菌介导的遗传转化方法,将本实验室克隆的抗褐飞虱基因Cry30Fa1转入其中,通过连续自交和DNA检测在T6代获得了目的基因纯合的转基因株系。通过目的基因PCR检测和抗性表达鉴定,确定T5、T6代转基因材料中的选择标记基因Hyg(R)和抗虫基因Cry30Fa1,最终筛选到无选择标记基因的转基因水稻株系。采用实时荧光定量PCR技术检测Cry30Fa1基因的转录情况。同时,基于实时荧光定量PCR技术也检测了转基因材料中的Cry30Fa1基因拷贝数。采用Western Blot检测Cry30Fa1基因蛋白表达情况。采用苗期集团抗虫性鉴定法、苗期单株抗虫性鉴定法和田间抗虫性鉴定法,分别对3个转基因株系进行了抗虫性分析,筛选到中抗以上水平的抗褐飞虱转基因水稻株系。此外,我们还对T6代转基因水稻株系的主要农艺性状进行了调查。主要结果如下：1.对T5代的184个转基因株系进行Cry30Fa1基因的PCR检测,发现其中150个株系含有Cry30Fa1基因,而且T6代跟踪检测中筛选到29个目的基因纯合的转基因株系。通过对29个转基因株系进行了Hyg(R)基因PCR检测和浸泡表达检测,最终获得了15个无选择标记基因的转基因株系。2.通过实时荧光定量PCR技术,本研究对29个T6代转基因株系的Cry30Fa1基因在转录水平上的表达进行了检测,结果显示,所有转基因株系的Cry30Fa1基因在转录水平上均有表达,但表达量差异较大,相对表达量在0.19-8.53之间。3.通过Western Blot技术,本研究对29个T6代转基因株系Cry30Fa1基因在蛋白质水平上的表达进行了检测,结果显示,5个转基因株系中没有检测到Bt蛋白质,余下的24个转基因株系的Bt蛋白均有表达,但转基因株系中Bt蛋白表达量存在较大差异,分布在0.13到11.6之间。4.通过分析了转基因植株中Cry30Fa1基因拷贝数,本研究发现29个转基因株系中Cry30Fa1基因拷贝数存在较大差异,但有15个株系的拷贝数属于低拷贝的株系。5.采用苗期集团抗虫性鉴定法和田间抗虫性鉴定法对其中3个转基因株系进行了抗虫性分析,结果发现,苗期抗性均达到了7级,属于中感材料；田间抗性达到3-5级,属于中抗到抗的材料。同时,采用苗期单株抗虫性鉴定法,对以上3个转基因株系进行了杀虫性分析,结果表明,3个转基因株系中的褐飞虱死亡率显著高于亲本R818,这说明了转基因株系增加了杀虫能力。6.通过对29个转基因株系主要农艺性状进行分析,结果表明,外源Bt基因对水稻株高影响最大,有19个株系与亲本之间存在显著性差异；外源Bt基因对其它农艺性状如抽穗期、有效分蘖数、主穗长、结实率、千粒重等的影响较小。通过数据分析发现性状得到改良的株系比性状变差的株系多,这说明通过分子水平检测和田间选育工作相结合,总会选到和亲本相似农艺性状甚至是优于亲本的转基因株系。目前,正在对余下的26个转基因株系进行全面抗虫性分析,以期获得更多抗褐飞虱的转基因株系。