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F-box蛋白在泛素介导的蛋白质水解过程中可以特异性地识别待降解底物,从而达到降解蛋白质的目的。近年来,越来越多的研究表明,F-box蛋白在植物抵抗生物和非生物逆境胁迫过程中发挥着重要的作用。F-box蛋白是否参与小麦对叶锈菌的防御呢?本研究以小麦/叶锈菌互作组合为研究对象,从基因克隆、基因特性分析、组织表达特性研究、叶锈菌侵染相关表达分析、酵母双杂交等方面对F-box基因TaFBL14开展系列研究。主要研究结果如下: 1.克隆获得4条小麦F-box基因片段:TaFBL14-1(1634bp)、TaFBL14-2(1488bp)、TaFBL14-3(704bp)、TaFBL14-4(1800bp)。TaFBL14-1和TaFBL14-2的核苷酸序列相似性最高,TaFBL14-4与另外3条基因的核苷酸序列相似性最差。TaFBL14-1包含完整的ORF区,编码485个氨基酸组成的多肽,等电点为6.17,预测的分子量为53kDa,该蛋白含有一个F-box基序以及7个LRR结构域,亚细胞定位预测该蛋白可能定位于细胞质基质中。 2.通过qRT-PCR分析TaFBL14-1和TaFBL14-2在小麦TcLr15不同组织部位及受叶锈菌侵染后的表达情况。TaFBL14-1在TcLr15的幼叶和旗叶中表达量较高,TaFBL14-2在雌蕊和旗叶中的表达量较高。TaFBL14-1和TaFBL14-2在抗病组合中各个时间点的表达量均高于感病组合,表明这2条基因可能参与小麦抵抗叶锈菌的侵染过程。 3.成功构建了诱饵载体pGBKT7-TaFBL14-1,并证明了诱饵质粒pGBKT7-TaFBL14-1对酵母菌生长无毒害作用和自激活的活性。 4.成功克隆了两个基因TaSKP1和TaRubisco的全长编码区,分别构建了包含这两个基因的表达载体pGADT7-TaSKP1和pGADT7-TaRubisco,与pGBKT7-TaFBL14-1共转化Y187后,证明了两个蛋白与TaFBL14-1不存在互作关系。