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本文对三种念珠藻中超氧化物歧化酶基因的克隆及活性进行了研究。主要内容如下:
1)根据基因文库中公布的编码地木耳超氧化物歧化酶的基因设计引物,通过不同念珠藻总DNA提取,PCR技术,分别获取了5个不同藻株的目的基因片段,再将目的基因克隆到载体pUC19上,测得序列。
2)利用感受态细菌进行转化,SDS-PAGE分析,获得了以可溶性形式表达的不同念珠藻的超氧化物歧化酶,利用SDS-PAGE分析,其大小符合Fe-SOD。
3)发菜在NaCl胁迫下处理48小时后,即使是在0.8mol·L<-1> NaCl胁迫下,其活性也变化很小,在0-36小时之间,几乎没有任何变化,仅在36小时后才有很小的变化,活性下降了仅约15%左右,而且这种变化似乎于盐浓度的高低没有什么关系。
4)发菜在不同pH胁迫下处理48小时后,其SOD活性不仅没有下降,还有稍微的上升,而且在较酸性环境下(pH5.4),SOD活性在胁迫36小时后仍维持较高水平。
5)发菜在不同的温度胁迫处理下,活性有所变化,但相对地木耳、葛仙米而言总体变化不大,但在高温35℃使,一段时间后出现了完全解体的情况,无法再测定酶的活性。