荧光探针内源性检测的应用

来源 :华北电力大学(北京)   | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangtie123
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亚铜离子(Cu+)是铜在细胞质还原环境中的主要氧化态,也是人体中第三重要的微量元素,当其存在过多时,会破坏人体蛋白质的活性,导致细胞坏死,引发关节炎,癌症等疾病。所以Cu+在人体中的含量与人体健康直接相关。但Cu+的化学性质不稳定,空气中的Cu+迅速被氧化为Cu2+和铜单质,所以其在空气中几乎不存在。本实验主要研究内容包括:
  1、以亚铁离子(Fe2+)和铜离子(Cu2+)反应制成Cu+,比较了电感耦合等离子体质谱法,化学发光法,原子吸收光谱法,荧光分析法四种常用的检测方法。结果显示,电感耦合等离子体质谱法具备检测限低的优点,但测试仪器体积过大,不利于现场检测;化学发光法具有测量快速、灵敏度高等优点,但一般用于标记催化酶,且发光不稳定,反应过程中易发生裂变。原子吸收光谱法选择性强、测定速度快灵敏度高。但标准曲线的线性范围窄,需进行样品前处理。因此从各方面综合分析,荧光分析法具备灵敏度高、选择性好、使用方便、合成成本低、且具有良好的生物相容性。更适合用于Cu+的检测。
  2、利用荧光分析法对Cu+的性质进行检测。Cu+最佳反应条件是在中性和微碱性环境下,与其他金属离子共存可被单一性检测。在蛋白质中进行测定时,回收率较高。检测探针本身具有高选择性和抗干扰性,可以进行定量检测。
  本课题研究了荧光探针AHP的内源性检测。该探针通过用Cu+氧化裂解C=S键,进而破坏探针分子的共轭结构而产生非荧光产物。与此同时,与Cu+反应后,探针在490nm处的特征吸收大大降低。伴随着探针从亮绿色到无色的剧烈荧光变化,呈现出明显的可视化特征。我们研究并证实探针可以定量检测蛋白质中的Cu+并具有低至15nM的检测限(GB5749-200650μM)。此外,我们将探针应用于蛋白质中的Cu+的检测,其显示出良好的低毒性。探针AHP在外源性检测Cu+和内源性荧光成像的应用上表现出极大的应用潜力。
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