【摘 要】
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动脉粥样硬化及其引起的心脑血管疾病是威胁人类生命和健康的主要疾病之一,研究表明,人体血液中低密度脂蛋白(LDL)的升高是引起动脉粥样硬化的独立危险因素。为研究LDL的理化
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动脉粥样硬化及其引起的心脑血管疾病是威胁人类生命和健康的主要疾病之一,研究表明,人体血液中低密度脂蛋白(LDL)的升高是引起动脉粥样硬化的独立危险因素。为研究LDL的理化性质及其功能,研究人员发明了多种LDL分离技术,如超速离心、化学沉淀、凝胶过滤层析及亲和层析等,但这些技术均有不足。在临床上,使用LDL吸附剂来去除血液中的LDL是降低LDL含量的方法之一,但目前这些方法价格昂贵,在一定程度上阻碍了这些技术的推广应用。因此,有必要研制出一种价格低廉又能高效、特异吸附LDL的亲和材料。本文利用M41型A群链球菌Ⅰ型胶原样蛋白Scll可以与LDL特异性结合这一性质,进行了LDL亲和吸附材料的制备研究。文中首先克隆、表达并纯化了重组蛋白rScll(包括V区、CL区和部分L区),并将rScll的V区分为两部分(V1和V2区),将V1区与CL-L区连接后得到rScllL,将V2区与CL-L区连接后得到rScllT。通过亲和色谱层析实验证明rScll和rScllT均与LDL结合,而rScllL不与LDL结合,表明Scll中的V2区是其与LDL结合的主要区域,同时证明rScll还能与HDL结合,而rScllT只能与LDL结合,说明rScllT可以用来特异性吸附LDL。接下来将rScll和rScllT与NHS-activated sepharose通过共价键偶联,成功制备了rScll-sepharose和rScllT-sepharose。两种亲和材料与人血浆的吸附试验表明二者均可特异性的与LDL结合,但rScll-sepharose同时可与HDL结合。通过rScllT-sepharose与人血清的吸附试验进一步表明rScllT-sepharose对LDL具有较高的吸附能力,说明rScllT-sepharose可能在LDL分离制备中具有潜在的应用价值。
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