猪瘟病毒及其在细胞中增殖的研究

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猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)属黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pistivirus),是有囊膜的正链RNA病毒.其基因组RNA约12.3kb,只有一个开放阅读框,其编码的多聚蛋白经加工后可形成11-12种病毒蛋白,其中包括四种结构蛋白:衣壳蛋白C、囊膜糖蛋白EE1和E2.CSFV是严重危害养猪业的畜病毒之一.《国际动物卫生法典》已将猪瘟列入A类16种法定传染病之一.该论文研究内容是国家攀登计划研究项目"畜禽重大疫病免疫防制基础研究"的一部分,主要研究目的是提高猪瘟病毒弱毒苗的毒价,并寻找新的更为实用的病毒检测方法.鉴于国外对猪瘟弱毒疫苗的增殖及其与宿主细胞关系方面的研究鲜有报导,国内也未见有关文献.该论文首次从基础的病毒学的角度研究猪瘟病毒的增殖特性,以了解猪瘟病毒的增殖过程及病毒与宿主细胞间的相互作用,以探索提高病毒滴度的新途径.同时,对病毒的形态结构及形态发生也做了初步研究.该论文主要取得如下进展:1.建立了CSFV-MPK细胞的感染模式,使维持液中T株病毒的滴度达到10<8>TCID<,50>/ml,CSFV株也可达到10<6>TCID<,50>/ml.这一结果不仅为CSFV的基础研究,而且也为提高CSFV病毒疫苗产量的研究打下基础;2.成功地应用免疫金银技术研究CSFV抗原的宿主细胞内的分布.这一技术既可用于T株,亦可用于C株,并能检测到免疫荧光技术难以检测出的E抗原的存在.同时,发现一株可产生较强荧光的CSFV C株.上述结果可望为疫苗生产提供简易可行的中间检测手段;3.对CSFV在细胞中的增殖特性进行了较为系统的研究.对猪温病毒一步生长曲线、抗原出现和含量变化时相,以及病毒的传播进行了研究.证明在原代牛睾丸细胞中,几乎所有细胞均可被CSFV感染,只是不同毒株的增殖时相不同;4.对CSFV与宿主细胞的相互关系进行了初步研究,实验结果支持了研究人员关于病毒与宿主细胞复杂的相互作用中,CSFV可能存在促进细胞增长和诱导细胞死亡两类因子的设想;5.以CSFV T株与C株病毒的细胞内增加殖的部位进行了分析,并显示其增殖可能与细胞骨架相关.此外,在电镜下还比较清晰地观察到病毒粒子的形态结构及其可能的释放过程.
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